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蘇州千舍生物科技有限公司

細(xì)胞凍存&細(xì)胞復(fù)蘇

時(shí)間：2022-4-8閱讀：972
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03細(xì)胞凍存：


試劑：凍存液，PBS,，胰酶,，含血清的培養(yǎng)基；
流程：要凍存,，先配置凍存液,，凍存液包含了：DMSO：防止在低溫（零度以下至-196℃）保存細(xì)胞時(shí)，細(xì)胞內(nèi)液會(huì)形成冰晶,，滲透壓會(huì)發(fā)生改變,，細(xì)胞結(jié)構(gòu)會(huì)出現(xiàn)紊亂，會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)損傷,。凍存液制備時(shí),，一般需與血清一起配置：因?yàn)閮烧呋ト跁r(shí),，會(huì)散發(fā)熱量,，所以凍存液需提前制備。
因?yàn)榧?xì)胞太多了,，需要凍存,，所以要先看一看，吸一吸,，洗一洗,，分一分，中和一下,，吹打制成細(xì)胞懸液,，離心，吸掉上清液,，加入凍存液,，輕輕吹吸均勻，每管等量1ml裝入凍存管,，4℃20min,-20℃30min,-80℃過夜,，最后放入液氮罐。
04細(xì)胞復(fù)蘇：
試劑：含血清的培養(yǎng)基,；
流程：從液氮中取出凍存管,，迅速（小于3min）置于37℃水浴鍋中，解凍時(shí),，邊晃動(dòng)邊觀察,，當(dāng)看到只有一小塊冰存在時(shí)，即可從水浴鍋中取出,，打開凍存管,，迅速將細(xì)胞懸液吸到離心管中,，輕輕混勻，1000r/min,離心五分鐘,，吸掉上清液,，沉淀中加入適量培養(yǎng)液，放入孵箱中,，培養(yǎng),。還有就是：復(fù)蘇的細(xì)胞，需要在24小時(shí)后,，換一次培養(yǎng)液,。



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