如何避免細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中的污染?

主要還是考慮無(wú)菌環(huán)境,，盡量做好操作臺(tái)的滅菌,，別把培養(yǎng)基滴落在生物安全柜的入風(fēng)口，別在培養(yǎng)箱里把培養(yǎng)基打翻,。這兩個(gè)地方霉菌一旦滋生,，那你就只能等著用甲醛熏蒸了。

紫外無(wú)法殺滅霉菌,，酒精也不行,，只能用甲醛熏蒸，但是一定要注意安全,。復(fù)蘇的時(shí)候,，水浴鍋也需要進(jìn)行滅菌處理。一旦出現(xiàn)污染,，不要急,，能救的就用抗生素救一下，但是一般情況下,，選擇扔掉,。避免交叉感染，要不只能整個(gè)實(shí)驗(yàn)室消毒了,。

如果細(xì)胞發(fā)生微生物污染時(shí),，應(yīng)如何處理？

原則上：直接滅菌后丟棄之,。

當(dāng)重要的培養(yǎng)污染時(shí),，研究者可能試圖消除或控制污染。首先,，確定污染物是細(xì)菌,、真菌、支原體或酵母,，把污染細(xì)胞與其它細(xì)胞系隔離開(kāi),，用實(shí)驗(yàn)室消毒劑消毒培養(yǎng)器皿和超凈臺(tái)，檢查HEPA過(guò)濾器,。

高濃度的抗生素和抗霉菌素可能對(duì)一些細(xì)胞系有毒性,，因而,，做劑量反應(yīng)實(shí)驗(yàn)確定抗生素和抗霉菌素產(chǎn)生毒性的劑量水平。這點(diǎn)在使用抗生素如霉素b和抗霉菌素如泰樂(lè)菌素時(shí)尤其重要,。下面是推薦的確定毒性水平和消除培養(yǎng)污染的實(shí)驗(yàn)步驟,。

1.在無(wú)抗生素的培養(yǎng)基中消化、計(jì)數(shù)和稀釋細(xì)胞,，稀釋到常規(guī)細(xì)胞傳代的濃度,。

2.分散細(xì)胞懸液到多孔培養(yǎng)板中，或幾個(gè)小培養(yǎng)瓶中,。在一個(gè)濃度梯度范圍內(nèi),，把選擇抗生素加入到每一個(gè)孔中,。例如,，霉素b推薦下列濃度，0.25,，0.50,，1.0，2.0,，4.0,8.0 mg/ml,。

3.每天觀測(cè)細(xì)胞毒性指標(biāo)，如脫落,，出現(xiàn)空泡,，匯合度下降和變圓。

4.確定抗生素毒性水平后,，使用低于毒性濃度2～3倍濃度的抗生素的培養(yǎng)液培養(yǎng)細(xì)胞2～3代,。

5.在無(wú)抗生素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)細(xì)胞一代。

6.重復(fù)步驟4,。

7.在無(wú)抗生素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)4～6代,，確定污染是否以已被消除。