— 胎牛血清有必要熱滅活嗎 —

01

目的

血清的滅活就是將血清置于56℃作用30min,，然后將它們分裝儲存于-20℃。熱滅活的目的是為了去除血清中的補體等對熱敏感的物質(zhì),，以排除對免疫分析的影響。胎牛血清中對補體的滅活則明顯沒有必要,。研究人員曾對商業(yè)胎牛血清中的補體成分進(jìn)行測定,，他們發(fā)現(xiàn)胎牛血清中含有的C1、C6僅達(dá)成年動物血清的1-3%,，而其它補體成分僅有成年動物的5-50%,，至于補體的主要成分C3在胎牛血清中則幾乎不能檢出,。通過補體固定實驗，我們也在多個不同批次的胎牛血清中獲得了相似的結(jié)果,。此外,，多數(shù)實驗室在培養(yǎng)前將培養(yǎng)液進(jìn)行預(yù)熱的過程，也對熱敏的補體有滅活的作用,。因此,，胎牛血清在大部分的細(xì)胞培養(yǎng)中是不需要滅活的，但在免疫學(xué)研究中,，培養(yǎng)ES細(xì)胞,、昆蟲細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞時，推薦使用熱滅活血清,。

02

負(fù)面影響

雖然熱滅活可以去除血清中的一些物質(zhì),，減少免疫球蛋白的細(xì)胞毒性而不破壞多肽生長因子，但同時也會對一些血清中較不穩(wěn)定的成分進(jìn)行破壞,，如生長因子和氨基酸,。熱滅活通常會降低血清支持細(xì)胞生長的能力，并且對血清的加熱經(jīng)常導(dǎo)致血清中沉淀的產(chǎn)生（這些沉淀主要是析出的纖維蛋白以及脂蛋白）,，而導(dǎo)致的沉淀又常常被認(rèn)為是微生物的污染,。注意到這個現(xiàn)象后，為了驗證污染的存在或促進(jìn)沉淀的溶解,，許多培養(yǎng)者往往將血清放置37℃溫育,，這將會導(dǎo)致情況變得更糟，因為血清中的蛋白質(zhì)會進(jìn)一步的析出,，再次破壞血清的營養(yǎng)成分,。而為了確定血清未被污染所進(jìn)行的鏡檢，無菌培養(yǎng)實驗以及革蘭氏染色實驗更是浪費了實驗者大量的時間以及精力,，給用戶以及供應(yīng)商帶來不必要的麻煩,。

— 結(jié)論 —

綜上所述，除了在免疫學(xué)研究中為排除補體的干擾需要對血清進(jìn)行滅活外,，多數(shù)細(xì)胞培養(yǎng)時血清的熱滅活并不是必要的,。我們建議，對于那些對血清進(jìn)行滅活的用戶,，需要通過對比試驗來證實其必要性,，并確定滅活的適當(dāng)條件；此外,，在滅活過程中,，需要嚴(yán)格認(rèn)真監(jiān)測，并選擇一個可重復(fù)的方案進(jìn)行操作,。