交叉污染雖不如微生物污染普遍,，但與HELA細胞及其他生長迅速的細胞系間廣泛的交叉污染是個明確的問題，會造成嚴重后果,。

從聲譽好的細胞庫獲取細胞系,、定期檢查細胞系性質(zhì)及采用良好的無菌技術(shù)有助于避免交叉污染。

通過DNA指紋圖譜、核型分析和同位素分析可確認有無交叉污染,。

血清與培養(yǎng)基

通常血清的添加比例為10%,，當(dāng)然也可根據(jù)細胞狀態(tài)和生長速率適當(dāng)增加或減少添加比例。在更換血清品牌或者批次時,，最好需對血清的品質(zhì)進行驗證,，防止對實驗造成影響。

對于培養(yǎng)基,，目前商品化的比較成熟,，穩(wěn)定性也較好。如若需自配培養(yǎng)基時,，過濾前攪拌時間不宜過長（培養(yǎng)基中營養(yǎng)豐富,，細菌常溫下20min就可繁殖一代，其代謝產(chǎn)物會對培養(yǎng)細胞培養(yǎng)瓶

目前商品化的細胞培養(yǎng)瓶主要為瓶蓋是否帶氣孔兩種,。其中不帶透氣孔細胞培養(yǎng)瓶擰緊后需適當(dāng)回旋瓶蓋,，保證CO2能順利進入細胞培養(yǎng)瓶。

細胞培養(yǎng)過程中,，對于適應(yīng)能力強的腫瘤細胞,，可在傳代3-4次后更換新的細胞培養(yǎng)瓶。對于非腫瘤細胞系如293T,，HEK293等細胞,，建議每次傳代更換新的細胞培養(yǎng)瓶來保證細胞狀態(tài)。

細胞傳代

正常細胞形態(tài)較好,，輪廓清晰,，邊緣透亮，細胞增殖狀況良好,。當(dāng)貼壁細胞長到密度90%時,，需進行傳代。

傳代時通常使用胰酶消化法,。該方法又分為干消化法和濕消化法,。

干消化法：胰酶浸潤后棄去胰酶，待細胞變圓后加入新鮮培養(yǎng)基吹下后再進行細胞傳代,。

濕消化法：待細胞變圓,，肉眼觀察下成流沙狀脫落時即可加入新鮮培養(yǎng)基終止消化，1000rpm離心5min,棄去上清,，用新鮮培養(yǎng)基重懸傳代,。

吹打細胞時，手法要輕柔,，避免吹打出氣泡,，造成細胞因內(nèi)外壓差破裂，同時需避免刮到壁影響細胞的貼壁,。

不同細胞的貼壁能力不同,，消化時間不同；不同細胞細胞間連接強度不一樣,，消化時間不同,；同一細胞生長狀狀況不同，消化時間不同,。消化時適時觀察細胞形態(tài),，避免因過度消化影響細胞活性。

傳代間隔時間和傳代比例因細胞而異,。細胞傳代過程中,，當(dāng)細胞出現(xiàn)狀態(tài)不好或者污染時及時棄去細胞，重新復(fù)蘇,。

細胞凍存與復(fù)蘇

當(dāng)細胞生長狀況較好或者代數(shù)較早時,，需及時大量的凍存。

細胞凍存液比例為培養(yǎng)基：血清：DMSO=7:2:1,，也可血清：DMSO=9:1,。細胞凍存密度通常為1-3×106個/ml。細胞凍存采用慢凍方式,，減少冰晶形成,，避免細胞損傷。通常4℃放置0.5 h,，-20℃放置2 h,，-80℃冰箱中過夜，取出凍存管,，移入液氮容器內(nèi),。

細胞復(fù)蘇時升溫要快，防止在解凍過程中水分進入細胞,，形成冰晶,，影響細胞存活。38℃水浴不時搖動,，在1分鐘內(nèi)使其*融化,，1000rpm離心5min,棄去上清，用新鮮培養(yǎng)基重懸移入培養(yǎng)瓶中,。

用真誠感動細胞

俗話說,，心誠則靈。對待細胞培養(yǎng)也應(yīng)如此,，“自己要用的細胞自己養(yǎng)",，多去觀察細胞生長狀態(tài),。