在日常培養(yǎng)過程中發(fā)現(xiàn)RAW264.7細(xì)胞容易出現(xiàn)的問題主要為以下幾種：

1.復(fù)蘇不易成功2.細(xì)胞形態(tài)變異明顯3.消化困難4.細(xì)胞生長緩慢,，當(dāng)你的細(xì)胞培養(yǎng)遇到上述瓶頸,，不妨試一試以下幾種解決辦法,。

1、復(fù)蘇難以成功

原因：RAW264.7對空間十分敏感,，復(fù)蘇密度太高,，細(xì)胞增殖太快，加劇細(xì)胞營養(yǎng)缺失,，加速細(xì)胞老化,。

解決辦法：T75培養(yǎng)瓶復(fù)蘇細(xì)胞數(shù)量控制在104~105

2、細(xì)胞變異明顯

原因：細(xì)胞吞噬抗原過多,、培養(yǎng)環(huán)境惡劣都會促使該細(xì)胞呈現(xiàn)梭形,、長梭形

解決辦法：改善細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境，例如與細(xì)胞接觸的玻璃器皿均高溫滅菌,，換flask培養(yǎng)瓶,，采用一次性器具,，使用質(zhì)量較高的胎牛血清

3,、消化困難

原因：細(xì)胞老化后，細(xì)胞偽足多且長,，使細(xì)胞難消化,，使用胰酶或細(xì)胞刮會對細(xì)胞損傷較大

解決辦法：無需胰酶使用吸管重復(fù)吹打，可消化大部分正常狀態(tài)的細(xì)胞,；但若細(xì)胞為“長腳"狀態(tài),，即使加入胰酶消化超過10min，也難以消化下來,，勉強(qiáng)消化,，對后續(xù)的實驗數(shù)據(jù)也有較大影響。

4,、生長緩慢

原因：支原體污染會導(dǎo)致細(xì)胞生長緩慢,，甚至難以貼壁

解決辦法：定期進(jìn)行支原體檢測，如發(fā)現(xiàn)支原體污染,，即刻使用支原體去除試劑