血清解凍后發(fā)現(xiàn)有絮狀沉淀物出現(xiàn)，該如何處理?

近期,，有些客戶(hù)再使用我司胎牛血清過(guò)程中,，發(fā)現(xiàn)血清融化后有些許沉淀（類(lèi)似頭皮屑的東西），擔(dān)心影響質(zhì)量,，不敢使用,！莫怕，莫怕,，小編搜集了些資料,，供大家參考,！

血清中沉淀物的出現(xiàn)有許多種原因，

但普遍的原因是由于血清中脂蛋白的變性所造成,，而血纖維蛋白(形成凝血的蛋白之一)在血清解凍后,，也會(huì)存在于血清中，亦是造成沉淀物的原因之一,。

但這些絮狀沉淀物,，并不影響血清本身的質(zhì)量。

若欲去除這些絮狀沉淀物,，

可將血清分裝至無(wú)菌離心管內(nèi)，以400轉(zhuǎn)/分離心1-2分鐘,上清液即可接著加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過(guò)濾,。

盡量不使用過(guò)濾的方法去除這些絮狀沉淀物,，因?yàn)樗赡軙?huì)阻塞過(guò)濾膜。

在解凍血清時(shí),，建議隨時(shí)將血清搖晃均勻,，使溫度及成分均一，減少沉淀的發(fā)生,。

各個(gè)大佬也有相關(guān)說(shuō)明,，如圖：

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胎牛血清保存方法

血清應(yīng)保存在-5℃至-20℃。然而,，若存放于4℃時(shí),，請(qǐng)勿超過(guò)一個(gè)月。若您一次無(wú)法用完一瓶,，建議將無(wú)菌分裝血清至恰當(dāng)?shù)臏缇萜鲀?nèi),，再放回冷凍。

a,、如何解凍血清才不會(huì)使產(chǎn)品質(zhì)量受損,？

將血清從冷凍箱取出后，先置于2-8℃冰箱使之溶解,，然后在室溫下使之全溶,。但必須注意的是，溶解過(guò)程中必須規(guī)則地?fù)u晃均勻,。

b,、避免產(chǎn)生沉淀物

1、解凍血清時(shí),，請(qǐng)按照所建議的逐步解凍法(-2℃至4℃至室溫),，若血清解凍時(shí)改變的溫度太大(如-20℃至37℃，實(shí)驗(yàn)顯示非常容易產(chǎn)生沉淀物,。

2,、解凍血清時(shí),，請(qǐng)隨時(shí)將之搖晃均勻，使溫度及成分均一,，減少沉淀的發(fā)生

3,、請(qǐng)勿將血清置于37℃太久。若在37℃放置太久,，血清會(huì)變得混濁,，同時(shí)血清中許多較不穩(wěn)定的成分也會(huì)因此受到損害，而影響血清的質(zhì)量,。

4,、血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要,，可以無(wú)須做此步驟,。

5、若必須做血清的熱滅活,，請(qǐng)遵守56℃,，30分鐘的原則，并且隨時(shí)搖晃均勻,。溫度過(guò)高,，時(shí)間過(guò)久或搖晃不均勻，都會(huì)造成沉淀物的增多,。 血清解凍后發(fā)現(xiàn)有絮狀沉淀物出現(xiàn),，該如何處理?　欲去除這些絮狀沉淀物，可以將血清分裝至無(wú)菌離心管內(nèi),，以400g稍微離心,，上清液即可接著加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過(guò)濾。但不建議以過(guò)濾的方法去除這些絮狀沉淀物,，因?yàn)樗赡軙?huì)阻塞過(guò)濾膜,。

c、何謂熱滅活

一般是以56℃,，30分鐘來(lái)處理已解凍的血清,，因?yàn)榇思訜岵襟E，可以使補(bǔ)體去活化,，而補(bǔ)體所參與的反應(yīng)有:溶細(xì)胞活性,，平滑肌的收縮，肥大細(xì)胞和血小板組胺的釋放,，增強(qiáng)吞噬作用,，淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞的趨化和激活,。

d,、有必要做熱滅活嗎

實(shí)驗(yàn)顯示,，經(jīng)過(guò)正確處理的熱滅活血清，對(duì)大多數(shù)的細(xì)胞而言是不需要的,。經(jīng)此處理過(guò)的血清對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)只有微小的促進(jìn),，或*沒(méi)有任何作用，甚至通常因?yàn)楦邷靥幚碛绊懥搜宓馁|(zhì)量,，而造成細(xì)胞生長(zhǎng)速率的降低,。而經(jīng)過(guò)熱處理的血清，沉淀物的形成會(huì)顯著的增多,，這些沉淀物在倒立顯微鏡下觀察,，像是 "小黑點(diǎn)"，常常會(huì)讓研究者誤以為是血清遭受污染,，而把血清放在37℃環(huán)境中,，又會(huì)使此沉淀物更增多，使研究者誤認(rèn)為是微生物的分裂擴(kuò)增,。購(gòu)買(mǎi)的時(shí)候注意詢(xún)問(wèn)廠家是否是已滅活血清。

e,、保存注意事項(xiàng)

（1）需要長(zhǎng)期保存的血清必須儲(chǔ)存于-20℃至- 70℃ 低溫冰箱中,。4℃冰箱中保存時(shí)間切勿超過(guò)1個(gè)月。由于血清結(jié)冰時(shí)體積會(huì)增加約10%,因此,血清在凍入低溫冰箱前,必須預(yù)留一定體積空間,否則易發(fā)生污染或玻璃瓶?jī)隽选?/span>

（2）熱滅活是指56℃,，30分鐘加熱已*解凍的血清,。加熱過(guò)程中須規(guī)則搖晃均勻。此熱處理的目的是使血清中的補(bǔ)體成分滅活,。除非必須,，一般不建議作此熱處理，因?yàn)闊崽幚頃?huì)造成血清沉淀物顯著增多,，而且還會(huì)影響血清的質(zhì)量,。補(bǔ)體參與反應(yīng)有：細(xì)胞毒作用，平滑肌細(xì)胞收縮,，肥大細(xì)胞和血小板釋放組胺,，增強(qiáng)吞噬作用，促進(jìn)淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞發(fā)生化學(xué)趨化和活化,。

（3）瓶裝血清解凍需采用逐步解凍法:-20℃ 至 -70℃ 低溫冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1天,。然后移入室溫，待全部溶解后再分裝,。在溶解過(guò)程中需不斷輕輕搖晃均勻（小心勿造成氣泡）,，使溫度與成分均一，減少沉淀的發(fā)生,。切勿直接將血清從-20℃進(jìn)入37℃解凍,，這樣因溫度改變太大,，容易造成蛋白質(zhì)凝集而出現(xiàn)沉淀。

（4）一般廠商提供的血清為無(wú)菌,，無(wú)需再過(guò)濾除菌,。如發(fā)現(xiàn)血清有懸浮物,則可將血清加入培養(yǎng)液內(nèi)一起過(guò)濾，切勿直接過(guò)濾血清,。

（5）血清中的沉淀物 絮狀物:主要是血清中的脂蛋白變性及解凍后血清中纖維蛋白造成,這些絮狀物不會(huì)影響血清本身的質(zhì)量,。可用離心3000rpm, 5分鐘去除,也可不用處理,。 顯微鏡下“小黑點(diǎn)”:經(jīng)過(guò)熱處理過(guò)的血清,沉淀物的形成會(huì)顯著增多,。有些沉淀物在顯微鏡下觀察象"小黑點(diǎn)",常誤認(rèn)為血清受污染。一般情況下,此小黑點(diǎn)不會(huì)影響細(xì)胞生長(zhǎng),，但如果懷疑血清質(zhì)量,，則應(yīng)立即停止使用,更換另一批號(hào)的血清。

（6）切勿將血清在37℃放置太久,，否則血清會(huì)變得渾濁,，同時(shí)血清中的有效成分會(huì)破壞而影響血清質(zhì)量。

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