蘇州千舍生物教你六招使用ELISA試劑盒

一,、實(shí)驗(yàn)原理

    用于免疫酶技術(shù)的酶有很多，如過(guò)氧化物酶,，堿性磷酸酯酶,，β－Ｄ－半乳糖苷酶，葡萄糖氧化酶,，碳酸酐酶,，乙酰膽堿酯酶，6－磷酸葡萄糖脫氧酶等,。常用于ELISA法的酶有辣根過(guò)氧化物酶,，堿性磷酸酯酶等，其中尤以辣根過(guò)氧化物酶為多,。由于酶摧化的是氧化還原反應(yīng),，在呈色后須立刻測(cè)定,，否則空氣中的氧化作用使顏色加深，無(wú)法準(zhǔn)確地定量,。 
     辣根過(guò)氧化物酶（HRP）是一種糖蛋白,，每個(gè)分子含有一個(gè)氯化血紅素（protonhemin）區(qū)作輔基。酶的濃度和純度常以輔基的含量表示,。氯化血紅素輔基的大吸收峰是403nm,，HRP酶蛋白的吸收峰是275nm，所以酶的濃度和純度計(jì)算式是（已知HRP的A（1cm 403nm 1%）＝25,，式中1％指HRP百分濃度為100ml含酶蛋白1g,，即10mg/ml，所以,，酶濃度以 mg/ml 計(jì)算是HRP的A（1cm 403nm mg/ml=2.5）HRP純度（RZ）=A403nm/A275nm純度RZ（Ｒeinheit Zahl）值越大說(shuō)明酶內(nèi)所含雜質(zhì)越少,。高純度HRP的RZ值在3.0左右，高可達(dá)3.4,。用于ELISA檢測(cè)的HRP的RZ值要求在3.0以上,。 

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  說(shuō)到ELISA試劑盒,，相信科研朋友們都不會(huì)陌生。ELISA試劑盒的誕生,，是為了幫助科研工作者省掉繁瑣的實(shí)驗(yàn)過(guò)程,，提高科研效率。如果選對(duì)了試劑盒,，用對(duì)了實(shí)驗(yàn)技巧,，就會(huì)讓您的實(shí)驗(yàn)效率事半功倍。將為您解析ELISA試劑盒六大使用技巧,，請(qǐng)收下,！

1,、查找待測(cè)樣本的蛋白濃度：可以通過(guò)NCBI的文獻(xiàn),，uniprot,，pax-dab上給出的蛋白表達(dá)量參考值來(lái)比較ELISA試劑盒中給出的樣本值與報(bào)道值是否一致；

2,、試劑盒的應(yīng)用種屬,、檢測(cè)樣本的種類(lèi)：除試劑盒特別說(shuō)明外，一般不同種屬不能通用,。常見(jiàn)待測(cè)樣本種類(lèi)有：血清和血漿（不同抗凝劑）,，細(xì)胞上清，和細(xì)胞裂解液,，試劑盒中不同樣本的稀釋液不混用,；

3、試劑盒的檢測(cè)范圍：也就是標(biāo)曲范圍,，特別要注意待測(cè)樣本濃度是否落在標(biāo)曲范圍內(nèi),，對(duì)于濃度很高的樣本，可以先進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)摸索到比較好的稀釋倍數(shù)后再大量測(cè)定樣本,。

Hyclone胎牛血清SH30084.03  ,、Hyclone胎牛血清SH30406.02  、Hyclone胎牛血清SH30406.05 ,、Hyclone胎牛血清SH30396.03  ,、Hyclone胎牛血清SH30070.03、Hyclone胎牛血清 SH30370.03  ,、活性炭/葡聚糖胎牛血清 SH30068.03 ,、馬血清SH30074.03 、烏拉圭胎牛血清 SV30087. 03 ,、Hyclone胎牛血清SH30071.03 ,、Hyclone胎牛血清SV30160.03。

BOVOGEN胎牛血清 SFBS ,、BOVOGEN新生牛血清 SNCS,。

BI優(yōu)等胎牛血清 04-001-1ACS 、BI ES級(jí)別胎牛血清 04-002-1A ,、

BI 間充質(zhì)胎牛血清 04-400-1A ,。

PAN胎牛血清FBS P30-3302  、PAN胎牛血清FBS ST30-3302 ,、PAN ES級(jí)別胎牛血清 ST30-2602 ,、PAN胎牛血清Plus ST30-3302P 。

NTC優(yōu)等胎牛血清 SFBE,。

Gemini優(yōu)等胎牛血清 900-108 ,、Gemini特級(jí)胎牛血清 100-500  、Gemini科研用人AB血清100-512 ,。

SBI 無(wú)外泌體血清 EXO-FBS-50A-1,、雙抗15140-122,、SV30010  、胰酶 25200-056,、SH30042.01 ,、GIBCO 胰酶 25200-072。

4,、試劑盒中的稀釋線(xiàn)性及回收率：

A,、稀釋線(xiàn)性一般指樣本稀釋線(xiàn)性，是將樣本梯度稀釋下來(lái),，看各稀釋梯度濃度是否成線(xiàn)性,，參考樣本稀釋線(xiàn)性可以選擇樣本的稀釋倍數(shù)；

B,、稀釋線(xiàn)性也有做加標(biāo)稀釋線(xiàn)性的情況,，加標(biāo)稀釋線(xiàn)性是將標(biāo)準(zhǔn)品加入樣本中測(cè)定加入的標(biāo)準(zhǔn)品濃度測(cè)定是否準(zhǔn)確，同樣也是確定待測(cè)樣本稀釋倍數(shù)的參考指標(biāo),。一般線(xiàn)性和回收率的范圍在80%-120%比較合適,；

5、試劑盒的其它指標(biāo)：

A,、靈敏度：試劑盒能夠檢測(cè)到的樣本zui低濃度的能力,，如果待檢指標(biāo)含量很低，需要選擇高靈敏度的ELISA試劑盒,；

B,、板間和板內(nèi)的變異系數(shù)（CV%）:反映板內(nèi)和不同板之間是否均勻，CV%一般小于10% 比較好,。

6,、試劑盒的有效期：試劑盒的有效期一般是半年至一年，樣本準(zhǔn)備時(shí)間需要考慮到試劑盒的有效期,。

    我公司ELISA試劑盒,，均經(jīng)過(guò)充分測(cè)試，以保證*的品質(zhì)和可重復(fù)性,。這種即用型的ELISA試劑盒,，含有ELISA實(shí)驗(yàn)所需的全部試劑和耗材，并通過(guò)精心挑選抗體對(duì),，及優(yōu)化配方稀釋液,，確保結(jié)果具有無(wú)以倫比的準(zhǔn)確性。如果您對(duì)我公司的胎牛血清,、人血清,、人AB血清、無(wú)外泌體血清SBI、新生牛血清等產(chǎn)品感興趣,，歡迎咨詢(xún)訂購(gòu),！