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基因工程中用到的連接酶主要是大腸桿菌DNA連接酶以及T4 DNA連接酶,，目前后者的應(yīng)用更為廣泛,。T4 DNA連接酶屬于DNA連接酶的一種。在載體構(gòu)建和酶切連接的分子克隆中,，可借助T4 DNA連接酶將插入片段連入載體中,。T4 DNA連接酶催化雙鏈DNA中鄰近的3′-羥基-和5′-磷酸末端之間形成磷酸二酯鍵。雙鏈DNA中單鏈切口也被T4 DNA連接酶封閉,。

T4 DNA 連接酶的功能特點(diǎn)：

連接類型：T4 DNA連接酶具有廣泛的底物特異性,，它可以連接雙鏈DNA的粘性末端和平頭末端。此外,，它還可以催化雙鏈RNA以及雙鏈RNA與DNA之間的連接,，但不能催化單鏈核酸的連接。需要注意的是,，雖然T4 DNA連接酶可以連接平末端,，但連接效率相對(duì)較低。

應(yīng)用廣泛：在基因工程中,，T4 DNA連接酶被廣泛應(yīng)用于DNA片段的連接,、質(zhì)粒的構(gòu)建、基因克隆等實(shí)驗(yàn)操作中,。