IAC-SEP<蘇p>®赭曲霉毒素A免疫親和柱

（產(chǎn)品編號：IAC105）

使用對象

IAC-SEP<蘇p>®赭曲霉毒素A免疫親和柱能夠特異性的純化與濃縮樣品中的赭曲霉毒素A,。赭曲霉毒素A免疫親和柱廣泛地應用于糧食,、飼料、大豆,、油菜籽,、植物油,、醬油,、醋,、醬及醬制品和酒類等樣品的提取，該方法速度快,、操作簡單,、準確性高，對準確靈敏的測定樣品中的赭曲霉毒素A起到十分重要的作用,。

IAC-SEP<蘇p>®赭曲霉毒素A免疫親和柱適用于以下標準：

GB/T 23502-2009 食品中玉赭曲霉毒素A的測定-免疫親和層析凈化高效液相色譜法

SN/T 1746-2006 進出口大豆、油菜籽和食用植物油中赭曲霉毒素A的檢測方法

原理

樣品經(jīng)甲醇+水提取液提取,、過濾、稀釋,，然后通過鍵合有赭曲霉毒素A特殊抗體的免疫親和柱,。此時，赭曲霉毒素A被親和柱中的抗體特異性的吸附,，用水或緩沖液將免疫親和柱上的雜質除去,，然后用甲醇使抗體變性,，從而將赭曲霉毒素A從親和柱上洗脫下來,。后，用HPLC或熒光計進行定量檢測,。

儲存條件

該親和柱保存在2-8 °C條件下,，不能冷凍，保質期為18個月,。建議在室溫（18-30°C）下使用,。

實驗溶液制備

提取液1，甲醇/水（8+2）：取80mL甲醇加20mL水,，混合均勻,。

提取液2，稱取150g氯化鈉,，20g碳酸氫鈉溶于900mL水中,，用水定容至1L

HPLC流動相，乙腈/水/乙酸（99+99+2）：取495mL乙腈和10mL乙酸于1L容量瓶中,，用純水定容至1L,，用0.22微米的尼龍篩過濾。

標準溶液的配制：取赭曲霉毒素A標準儲備液,，流動相為稀釋液,，配制標準品溶液。例如：取100uL標準品儲備液10ug/mL于10mL容量瓶中,，用流動相定容至10mL,，那么，赭曲霉毒素A標準品濃度為100ng/mL              

 注：配制好的標準品溶液有效期為7天,。

沖洗液：稱取25g氯化鈉,，5g碳酸氫鈉溶于900mL水中，用水定容至1L

真菌毒素清洗緩沖液：稱取25g氯化鈉,，5g碳酸氫鈉溶于900mL水中,，加入0.1mL吐溫-20，用水定容至1L

pH 7.0 PBS溶液：稱取8.0g氯化鈉,，1.44g磷酸氫二鈉,，0.24g磷酸二氫鉀，0.2gKCL,，用990mL純水溶解,，然后用濃鹽酸調節(jié)pH值至7.0，后用純水稀釋至1000mL,。

液相色譜條件

色譜柱：Cloversil-C18 4.6*150mm（5um）

流動相：乙腈/水/乙酸（99+99+2）

流速：0.8mL/min

檢測器：熒光檢測器,，激發(fā)波長333nm,發(fā)射波長477nm

進樣體積：20~100uL

分析步驟

赭曲霉毒素免疫親和柱的柱容量(大吸附赭曲霉毒素)為100ng，當樣品中赭曲霉毒素A超過測定范圍時，請適當減小上柱體積,，使其在檢測范圍內(nèi),，計算出準確含量。

1. 樣品提取及稀釋：

谷物,、糧食,、大豆、油菜籽,、植物油等樣品：（測定范圍0-250μg/kg） 稱取20g磨細的樣品,，5g 氯化鈉；置于250mL具塞錐形瓶中,，或勻質杯中,。加入100mL甲醇/水（8+2）溶液。以均質器高速勻質提取2min,。取下蓋子,，將提取物到入槽紋濾紙上，濾液收集于干凈的容器中,。移取10 mL上步的濾液,，置于干凈的容器中。用40 mL純水稀釋,，混勻,。將上步稀釋液通過玻璃微纖維過濾器，濾液收集于玻璃注射器筒中,，量取10mL準備上柱凈化,。

飼料,辣椒樣品：（測定范圍0-400μg/kg）稱取25g磨細的樣品，5g 氯化鈉,；置于250mL具塞錐形瓶中,，或勻質杯中,。加入100mL甲醇/水（8+2）溶液,。以均質器高速勻質提取2min。取下蓋子,，將提取物到入槽紋濾紙上,，濾液收集于干凈的容器中。移取5 mL上步的濾液,，置于干凈的容器中,。用45 mL pH 7.0 PBS溶液稀釋，混勻,。將上步稀釋液通過玻璃微纖維過濾器,，濾液收集于玻璃注射器筒中，量取10mL準備上柱凈化,。

酒類：（測定范圍0-62.5μg/kg）稱取20g樣品（含二氧化碳類酒稱取前置于4℃冰箱冷藏30min,，然后過濾或超聲制樣）,，置于25mL容量瓶中，加入提取液2定容至25mL,，搖勻,。移取10 mL上步的溶液，置于干凈的容器中,。用40 mL純水稀釋,，混勻。將上步稀釋液通過玻璃微纖維過濾器,，濾液收集于玻璃注射器筒中,，量取10mL準備上柱凈化。

醬油,，醋,，醬及醬制品：（測定范圍0-100μg/kg）稱取25g樣品，置于50mL容量瓶中,，加入甲醇/水（8+2）定容至50mL,，超聲提取2min。將提取物到入槽紋濾紙上,，濾液收集于干凈的容器中。移取10 mL上步的濾液,，置于干凈的容器中,。用40 mL純水稀釋，混勻,。將上步稀釋液通過玻璃微纖維過濾器,，濾液收集于玻璃注射器筒中，量取10mL準備上柱凈化,。

2） 樣品的凈化

谷物,、糧食、大豆,、油菜籽,、植物油、飼料,、辣椒,、醬油，醋,，醬及醬制品等樣品：將上步10 mL濾液,，以1滴/秒的流速全部通過赭曲霉毒素A免疫親合柱，直至空氣進入到親合柱中。用10 mL真菌毒素清洗液以1-2滴/秒的流速淋洗親合柱,；再用10mL純水以1-2滴/秒的流速淋洗親合柱,，直至空氣進入到親合柱中。用1.5 mL HPLC級的甲醇以1 滴/秒的流速淋洗親合柱,，將所有樣品淋洗液（1.5 mL)收集于玻璃測試管中,。將1.5mL淋洗液用1.5mL純水稀釋，混勻,，注入HPLC檢測,；或將1.5mL淋洗液在50℃氮氣下吹干，用1mL流動相定容后,，混勻,，注入HPLC檢測。

酒類：將上步10 mL濾液,，以1滴/秒的流速全部通過赭曲霉毒素A免疫親合柱,，直至空氣進入到親合柱中。用10 mL沖洗液以1-2滴/秒的流速淋洗親合柱,；再用10mL純水以1-2滴/秒的流速淋洗親合柱,，直至空氣進入到親合柱中。用1.5 mL HPLC級的甲醇以1 滴/秒的流速淋洗親合柱,，將所有樣品淋洗液（1.5 mL)收集于玻璃測試管中,。將1.5mL淋洗液用1.5mL純水稀釋，混勻,，注入HPLC檢測,；或將1.5mL淋洗液在50℃氮氣下吹干，用1mL流動相定容后,，混勻,，注入HPLC檢測。

高效液相色譜儀檢測赭曲霉毒素A的標準譜圖

注意事項

1. 親和柱凈化后的洗脫液不能用尼龍膜或有機系膜過濾,，負責會損失部分赭曲霉毒素,。
2. 樣品添加回收試驗時，標準品添加到樣品中,，靜置2小時后或過夜,，再進行樣品前處理,，否則會出現(xiàn)回收率偏低的現(xiàn)象,。
3. 不要隨便更改操作說明書中的操作步驟，如需更改要和本公司技術部聯(lián)系,，確認更改是否合理,。
4. 操作步驟中，樣品過柱，淋洗,，洗脫時,，一定要控制好流速，不能太快,，否則會使檢測結果偏低,。
5. 如果將標準品直接過柱驗證回收率時，一定要確保標準上柱液中甲醇濃度不要超過25%,，否則會影響柱子的吸附能力,。
6. 試驗中使用的玻璃儀器等，一定要清洗干凈,，尤其是用次氯酸等處理過的儀器,，否則會使檢測結果偏低。
7. 當用氮氣濃縮洗脫液時,，氮氣流不要太大,，否則會損失部分赭曲霉毒素。

需要準備的設備及試劑