IAC-SEP<蘇p>®赭曲霉毒素A免疫親和柱

（產(chǎn)品編號(hào)：IAC105）

使用對(duì)象

IAC-SEP<蘇p>®赭曲霉毒素A免疫親和柱能夠特異性的純化與濃縮樣品中的赭曲霉毒素A,。赭曲霉毒素A免疫親和柱廣泛地應(yīng)用于糧食、飼料,、大豆,、油菜籽、植物油,、醬油,、醋、醬及醬制品和酒類等樣品的提取,，該方法速度快,、操作簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確性高,，對(duì)準(zhǔn)確靈敏的測(cè)定樣品中的赭曲霉毒素A起到十分重要的作用,。

IAC-SEP<蘇p>®赭曲霉毒素A免疫親和柱適用于以下標(biāo)準(zhǔn)：

GB/T 23502-2009 食品中玉赭曲霉毒素A的測(cè)定-免疫親和層析凈化高效液相色譜法

SN/T 1746-2006 進(jìn)出口大豆,、油菜籽和食用植物油中赭曲霉毒素A的檢測(cè)方法

原理

樣品經(jīng)甲醇+水提取液提取、過(guò)濾,、稀釋,，然后通過(guò)鍵合有赭曲霉毒素A特殊抗體的免疫親和柱。此時(shí),，赭曲霉毒素A被親和柱中的抗體特異性的吸附,，用水或緩沖液將免疫親和柱上的雜質(zhì)除去，然后用甲醇使抗體變性,，從而將赭曲霉毒素A從親和柱上洗脫下來(lái),。后，用HPLC或熒光計(jì)進(jìn)行定量檢測(cè),。

儲(chǔ)存條件

該親和柱保存在2-8 °C條件下,，不能冷凍，保質(zhì)期為18個(gè)月,。建議在室溫（18-30°C）下使用,。

實(shí)驗(yàn)溶液制備

提取液1，甲醇/水（8+2）：取80mL甲醇加20mL水,，混合均勻,。

提取液2，稱取150g氯化鈉,，20g碳酸氫鈉溶于900mL水中,，用水定容至1L

HPLC流動(dòng)相，乙腈/水/乙酸（99+99+2）：取495mL乙腈和10mL乙酸于1L容量瓶中,，用純水定容至1L,，用0.22微米的尼龍篩過(guò)濾。

標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制：取赭曲霉毒素A標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液,，流動(dòng)相為稀釋液,，配制標(biāo)準(zhǔn)品溶液。例如：取100uL標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液10ug/mL于10mL容量瓶中,，用流動(dòng)相定容至10mL,，那么，赭曲霉毒素A標(biāo)準(zhǔn)品濃度為100ng/mL              

 注：配制好的標(biāo)準(zhǔn)品溶液有效期為7天,。

沖洗液：稱取25g氯化鈉,，5g碳酸氫鈉溶于900mL水中，用水定容至1L

真菌毒素清洗緩沖液：稱取25g氯化鈉,，5g碳酸氫鈉溶于900mL水中，加入0.1mL吐溫-20,，用水定容至1L

pH 7.0 PBS溶液：稱取8.0g氯化鈉,，1.44g磷酸氫二鈉,，0.24g磷酸二氫鉀，0.2gKCL,，用990mL純水溶解,，然后用濃鹽酸調(diào)節(jié)pH值至7.0，后用純水稀釋至1000mL,。

液相色譜條件

色譜柱：Cloversil-C18 4.6*150mm（5um）

流動(dòng)相：乙腈/水/乙酸（99+99+2）

流速：0.8mL/min

檢測(cè)器：熒光檢測(cè)器,，激發(fā)波長(zhǎng)333nm,發(fā)射波長(zhǎng)477nm

進(jìn)樣體積：20~100uL

分析步驟

赭曲霉毒素免疫親和柱的柱容量(大吸附赭曲霉毒素)為100ng，當(dāng)樣品中赭曲霉毒素A超過(guò)測(cè)定范圍時(shí),，請(qǐng)適當(dāng)減小上柱體積,，使其在檢測(cè)范圍內(nèi)，計(jì)算出準(zhǔn)確含量,。

1. 樣品提取及稀釋：

谷物,、糧食、大豆,、油菜籽,、植物油等樣品：（測(cè)定范圍0-250μg/kg） 稱取20g磨細(xì)的樣品，5g 氯化鈉,；置于250mL具塞錐形瓶中,，或勻質(zhì)杯中。加入100mL甲醇/水（8+2）溶液,。以均質(zhì)器高速勻質(zhì)提取2min,。取下蓋子，將提取物到入槽紋濾紙上,，濾液收集于干凈的容器中,。移取10 mL上步的濾液，置于干凈的容器中,。用40 mL純水稀釋,，混勻。將上步稀釋液通過(guò)玻璃微纖維過(guò)濾器,，濾液收集于玻璃注射器筒中,，量取10mL準(zhǔn)備上柱凈化。

飼料,辣椒樣品：（測(cè)定范圍0-400μg/kg）稱取25g磨細(xì)的樣品,，5g 氯化鈉,；置于250mL具塞錐形瓶中，或勻質(zhì)杯中,。加入100mL甲醇/水（8+2）溶液,。以均質(zhì)器高速勻質(zhì)提取2min。取下蓋子，將提取物到入槽紋濾紙上,，濾液收集于干凈的容器中,。移取5 mL上步的濾液，置于干凈的容器中,。用45 mL pH 7.0 PBS溶液稀釋,，混勻。將上步稀釋液通過(guò)玻璃微纖維過(guò)濾器,，濾液收集于玻璃注射器筒中,，量取10mL準(zhǔn)備上柱凈化。

酒類：（測(cè)定范圍0-62.5μg/kg）稱取20g樣品（含二氧化碳類酒稱取前置于4℃冰箱冷藏30min,，然后過(guò)濾或超聲制樣）,，置于25mL容量瓶中，加入提取液2定容至25mL,，搖勻,。移取10 mL上步的溶液，置于干凈的容器中,。用40 mL純水稀釋,，混勻。將上步稀釋液通過(guò)玻璃微纖維過(guò)濾器,，濾液收集于玻璃注射器筒中,，量取10mL準(zhǔn)備上柱凈化。

醬油,，醋,，醬及醬制品：（測(cè)定范圍0-100μg/kg）稱取25g樣品，置于50mL容量瓶中,，加入甲醇/水（8+2）定容至50mL,，超聲提取2min。將提取物到入槽紋濾紙上,，濾液收集于干凈的容器中,。移取10 mL上步的濾液，置于干凈的容器中,。用40 mL純水稀釋,，混勻。將上步稀釋液通過(guò)玻璃微纖維過(guò)濾器,，濾液收集于玻璃注射器筒中,，量取10mL準(zhǔn)備上柱凈化。

2） 樣品的凈化

谷物,、糧食,、大豆,、油菜籽、植物油,、飼料,、辣椒、醬油,，醋，醬及醬制品等樣品：將上步10 mL濾液,，以1滴/秒的流速全部通過(guò)赭曲霉毒素A免疫親合柱,，直至空氣進(jìn)入到親合柱中。用10 mL真菌毒素清洗液以1-2滴/秒的流速淋洗親合柱,；再用10mL純水以1-2滴/秒的流速淋洗親合柱,，直至空氣進(jìn)入到親合柱中。用1.5 mL HPLC級(jí)的甲醇以1 滴/秒的流速淋洗親合柱,，將所有樣品淋洗液（1.5 mL)收集于玻璃測(cè)試管中,。將1.5mL淋洗液用1.5mL純水稀釋，混勻,，注入HPLC檢測(cè),；或?qū)?.5mL淋洗液在50℃氮?dú)庀麓蹈桑?mL流動(dòng)相定容后,，混勻,，注入HPLC檢測(cè)。

酒類：將上步10 mL濾液,，以1滴/秒的流速全部通過(guò)赭曲霉毒素A免疫親合柱,，直至空氣進(jìn)入到親合柱中。用10 mL沖洗液以1-2滴/秒的流速淋洗親合柱,；再用10mL純水以1-2滴/秒的流速淋洗親合柱,，直至空氣進(jìn)入到親合柱中。用1.5 mL HPLC級(jí)的甲醇以1 滴/秒的流速淋洗親合柱,，將所有樣品淋洗液（1.5 mL)收集于玻璃測(cè)試管中,。將1.5mL淋洗液用1.5mL純水稀釋，混勻,，注入HPLC檢測(cè),；或?qū)?.5mL淋洗液在50℃氮?dú)庀麓蹈桑?mL流動(dòng)相定容后,，混勻,，注入HPLC檢測(cè)。

高效液相色譜儀檢測(cè)赭曲霉毒素A的標(biāo)準(zhǔn)譜圖

注意事項(xiàng)

1. 親和柱凈化后的洗脫液不能用尼龍膜或有機(jī)系膜過(guò)濾,，負(fù)責(zé)會(huì)損失部分赭曲霉毒素,。
2. 樣品添加回收試驗(yàn)時(shí)，標(biāo)準(zhǔn)品添加到樣品中，靜置2小時(shí)后或過(guò)夜,，再進(jìn)行樣品前處理,，否則會(huì)出現(xiàn)回收率偏低的現(xiàn)象。
3. 不要隨便更改操作說(shuō)明書(shū)中的操作步驟,，如需更改要和本公司技術(shù)部聯(lián)系,，確認(rèn)更改是否合理。
4. 操作步驟中,，樣品過(guò)柱,，淋洗，洗脫時(shí),，一定要控制好流速,，不能太快，否則會(huì)使檢測(cè)結(jié)果偏低,。
5. 如果將標(biāo)準(zhǔn)品直接過(guò)柱驗(yàn)證回收率時(shí),，一定要確保標(biāo)準(zhǔn)上柱液中甲醇濃度不要超過(guò)25%，否則會(huì)影響柱子的吸附能力,。
6. 試驗(yàn)中使用的玻璃儀器等,，一定要清洗干凈，尤其是用次氯酸等處理過(guò)的儀器,，否則會(huì)使檢測(cè)結(jié)果偏低,。
7. 當(dāng)用氮?dú)鉂饪s洗脫液時(shí)，氮?dú)饬鞑灰?，否則會(huì)損失部分赭曲霉毒素,。

需要準(zhǔn)備的設(shè)備及試劑