食品中folic acid 葉酸免疫親和柱 IAC-SEP

IAC-SEP®葉酸免疫親和柱

                            （產(chǎn)品編號(hào)：IAC322）   

原理

葉酸免疫親和柱能夠特異性的純化樣品中的葉酸,，將樣品與提取液混合,、提取、過(guò)濾,，然后將濾液通過(guò)免疫親和柱,。此時(shí)，葉酸物質(zhì)鍵合在親和柱中的抗體上,。用蒸餾水將免疫親合柱上的雜質(zhì)除去,。用洗脫液通過(guò)分離柱，將葉酸從抗體上分離下來(lái),。后,，將洗脫液注入HPLC或LC-MS進(jìn)行測(cè)定。

儲(chǔ)存條件

該親和柱保存在2-8 °C條件下,，不能冷凍,，保質(zhì)期為18個(gè)月。建議在室溫（18-30°C）下使用,。

實(shí)驗(yàn)溶液制備

        pH7.4 PBS溶液：8.0 克NaCl + 2.90克Na2HPO4 12H2O + 0.24 克 KH2PO4 + 0.2克KCl  加990mL純水溶解,，加純水至1升。

     10%抗壞血酸鈉：稱(chēng)取10g L-抗壞血酸鈉100mL容量瓶中,，加水溶解混勻,。

      洗脫液（30%乙腈+0.2%三fu乙酸）: 準(zhǔn)確量取30mL乙腈加入到100mL容量瓶中，然后再加入0.2mL 三fu乙酸,，后用純水定容至100mL,。

所需其他試劑：胰酶（sigma P1750）

液相色譜條件

色譜柱： Agilent-C18,4.6×150mm（5um）

流動(dòng)相：0.1%三fu乙酸：乙腈=85:15（v/v）

流速：0.5 mL/min

檢測(cè)器：紫外檢測(cè)器，280nm

進(jìn)樣體積：50uL

分析步驟

1） 樣品提取及稀釋：

嬰兒配方食品,、嬰兒即食食品,、牛奶、奶粉,、谷物,、能量棒等樣品的操作步驟：稱(chēng)取 1-10g樣品（根據(jù)需要的檢測(cè)范圍確定稱(chēng)量多少），置于250 mL錐形瓶中,。將50mL pH7.4 PBS溶液加入到錐形瓶中,，混勻。加入4g 胰酶,，搖床震蕩10分鐘,。加入6mL 10%抗壞血酸鈉，搖床震蕩5分鐘,。將錐形瓶置于37℃的水浴搖床震蕩2 h,。然后將錐形瓶置于100℃的水浴中靜置20min,。取出錐形瓶冷卻至室溫；用pH7.4 PBS溶液定容至100mL,，搖勻,。將提取液4000 RPM離心10 min。準(zhǔn)確移取吸取上層液10 mL,，備用,。

2） 樣品的凈化

   葉酸免疫親和柱的柱容量(吸附葉酸)為450ng，當(dāng)樣品中葉酸超過(guò)測(cè)定范圍時(shí),，請(qǐng)適當(dāng)減小上柱體積,，使其在檢測(cè)范圍內(nèi)，計(jì)算出準(zhǔn)確含量,。

食品中folic acid 葉酸免疫親和柱 IAC-SEP