詳細(xì)介紹
一,、簡介:
Exosome(外泌體)是具有脂質(zhì)雙層膜結(jié)構(gòu)、直徑約為30-150nm,、密度在1.13-1.21g/ml的膜性囊泡,。在exosome的囊泡結(jié)構(gòu)中含有細(xì)胞來源相關(guān)的蛋白質(zhì)、核酸,、脂質(zhì)和小分子等物質(zhì),,能作為信號分子傳遞給其他細(xì)胞以進行細(xì)胞間通訊。研究發(fā)現(xiàn)exosome在眾多生理,、病理過程中發(fā)揮著著重要作用,。鑒于不同細(xì)胞分泌的exosome具有不用的組成成分和功能,故而exosome有望在多種疾病的早期診斷中發(fā)揮作用,,此外,,基于exosome的膜性結(jié)構(gòu),亦可作為靶向藥物的載體進行疾病治療,。Exosome的這些特性使其成為當(dāng)前的熱門研究對象,。
Exosome在細(xì)胞中的蛋白質(zhì)含量極低,分離并獲取足量的exosome蛋白是進行LC-MS分析的前提條件,。SILAC結(jié)合LC-MS就能很好的進行exosome蛋白的定量比較分析,,體現(xiàn)在:(1)SILAC是體內(nèi)標(biāo)記,自然在exosome中的蛋白質(zhì)也是SILAC標(biāo)記的,;(2)所需的蛋白量少,,SILAC標(biāo)記的和未標(biāo)記的exosome蛋白各15-20μg足夠進行MS鑒定與定量;(3)蛋白質(zhì)提取和后續(xù)操作步驟極為簡單方便,,只需提取exosome蛋白,、定量,、1:1混合即可。(3)蛋白質(zhì)定量和分析軟件成熟(Maxquant和Perseus),,結(jié)果分析方便直觀,。
二、SILAC-exosome定量分析蛋白組學(xué)服務(wù)方案:
(一)整體服務(wù):
只需客戶提供細(xì)胞即可,,我方負(fù)責(zé)完成:
SILAC培養(yǎng)基制備。
細(xì)胞SILAC標(biāo)記及標(biāo)記效率MS檢測,;
SILAC標(biāo)記細(xì)胞與非標(biāo)記細(xì)胞擴增,、exosome分離及exosome蛋白質(zhì)提取,;
提取蛋白質(zhì)定量,、1:1混合、SDS-PAGE分離及染色,;
切割條帶,,分別進行LC-MS測試;
MS數(shù)據(jù)分析,,完成蛋白質(zhì)的鑒定及定量分析,,篩選差異表達(dá)蛋白;
差異表達(dá)蛋白常規(guī)生物信息學(xué)分析,;
(二)合作共贏方案:
原則是通過協(xié)商簽訂合同,,雙方各完成一部分實驗內(nèi)容。
客戶方需從我方購買相應(yīng)的SILAC培養(yǎng)基及耗材,。我方提供細(xì)胞SILAC標(biāo)記的實驗方案,,協(xié)助客戶完成細(xì)胞的SILAC標(biāo)記過程。
標(biāo)記完成后,,需用LC-MS鑒定細(xì)胞標(biāo)記效率,。該步驟需交由我方完成鑒定。
終正式實驗的蛋白質(zhì)樣品,,需交由我方完成MS鑒定和定量分析,。
三、其他特色:
SILAC培養(yǎng)基,。我方能生產(chǎn)多種類型的SILAC培養(yǎng)基(K6R6,、K4R6、K6R8,、K8R10等),,7-10個工作日發(fā)貨,免去客戶從國外進口SILAC培養(yǎng)基及其標(biāo)記氨基酸的漫長貨期,。
SILAC培養(yǎng)基,,500ml起訂,。
我方同時銷售SILAC相關(guān)的試劑/耗材(dialyzed FBS,filter等),,歡迎咨詢,。SILAC-exosome定量分析蛋白組學(xué)服務(wù)