轉(zhuǎn)染試劑AD600050轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染RAW264.7細胞質(zhì)粒2024新

 

RAW264.7細胞質(zhì)粒轉(zhuǎn)染試劑進入細胞后可以被代謝的新型小分子多肽轉(zhuǎn)染試劑,，對細胞無毒性，不易出現(xiàn)細胞死亡,，不激活細胞免疫機制,。

一、RAW264.7細胞質(zhì)粒轉(zhuǎn)染試劑產(chǎn)品詳情：

Zeta Life 公司與美國加利福尼亞大學舊金山校區(qū)聯(lián)合開發(fā)用于哺乳動物細胞,、活體動物轉(zhuǎn)染的 Advanced DNA RNA 第三代多肽小分子轉(zhuǎn)染試劑,，此技術成為新的蛋白功能、免疫細胞及干細胞治療,、研發(fā)及生產(chǎn)的主要關鍵技術之一,。Zeta Life轉(zhuǎn)染試劑可轉(zhuǎn)染極度難轉(zhuǎn)染的免疫細胞、懸浮細胞,，如:T細胞,、NK細胞、人淋巴細胞,、THP-1等,；可高效率轉(zhuǎn)染siRNA到任何哺乳動物細胞;用于將 DNA 和 siRNA 轉(zhuǎn)染到真核細胞系和各種原代細胞中；轉(zhuǎn)染細胞后可10小時內(nèi)快速代謝的第三代新轉(zhuǎn)染試劑,。

二,、產(chǎn)品說明：

1、產(chǎn)品名稱

Advanced DNA RNA Transfection Reagent

2,、包裝規(guī)格

貨號：AD600025 ,、AD600050、AD600075,、AD600150

規(guī)格：0.25ml、0.5ml,、0.75ml,、1.5ml

3、儲存條件

常溫運輸,，4℃保存,，可保存兩年，拒絕反復凍融,。

三,、RAW264.7細胞質(zhì)粒轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染質(zhì)粒大小6000bp效果圖和轉(zhuǎn)染操作方法

 

操作方法

提前 1 天接種細胞：細胞匯合度在 60-80%左右,，再進行轉(zhuǎn)染。

核酸復合物制備：將核酸與轉(zhuǎn)染試劑按照 1:1 關系直接混合,，用移液器吹吸 10-15 次混勻,，室溫靜 止 10-15 分鐘。

在細胞培養(yǎng)基中加入核酸復合物：根據(jù)參考用量在細胞中加入核酸復合物,，并輕輕混勻,；細胞培養(yǎng)基 里面可以含有血清。

細胞換液：轉(zhuǎn)染 24 小時后對細胞進行正常換液,，懸浮細胞轉(zhuǎn)染過程中不用換液,。

分析結(jié)果：質(zhì)粒 DNA 轉(zhuǎn)染 48-72 小時后熒光檢測轉(zhuǎn)染效率，48-96 小時檢測 mRNA 或蛋白表達,。若 進行穩(wěn)定表達細胞株的篩選,，則在轉(zhuǎn)染后 24-48 小時左右加入適量的藥物進行篩選。siRNA 轉(zhuǎn)染后 9 小時熒光檢測轉(zhuǎn)染效率,，48-72 小時檢測 mRNA 或蛋白表達,。

四、注意事項：

1,、質(zhì)粒 DNA 必須溶解于無菌雙蒸水或超純水,，但不能溶解于提取試劑盒提供的 Buffer。溶解于 Buffer 的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染效率會下降 80%左右,，甚至會轉(zhuǎn)染失敗,。

2、質(zhì)粒必須去除內(nèi)毒素,，內(nèi)毒素對細胞將產(chǎn)生很大的細胞毒性,，會導致轉(zhuǎn)染效率下降 70%-80%左 右，甚至導致轉(zhuǎn)染失?。ㄍ扑]使用 Qiagen,、TIANGEN、Omega 去內(nèi)毒素質(zhì)粒提取試劑盒）,。

3,、復合物的制備過程中是絕不能用其他任何試劑對核酸或轉(zhuǎn)染試劑進行稀釋，只需將核酸和轉(zhuǎn)染 試劑兩者按 1:1 比例直接混合,，如果進行了稀釋會導致轉(zhuǎn)染失,。

4、轉(zhuǎn)染試劑與核酸混勻后用移液器吹打 10-15 次,，室溫孵育 10-15 分鐘后即可加入細胞培養(yǎng)板,。

5、轉(zhuǎn)染 24 小時后進行正常換液，不能像 Lipo2000 一樣轉(zhuǎn)染 4-6 小時后換液,。

6,、原代細胞、免疫細胞轉(zhuǎn)染時,，細胞基礎培養(yǎng)基里面不能含有雙抗培養(yǎng)基,。