Zeta Life 轉染試劑轉染raw 264.7細胞經(jīng)驗分享2024新

 

為了轉染raw 264.7小鼠巨噬單核細胞我們實驗室嘗試了lipo3000,、,FuGENE 6、FuGENE HD,、Effectene等其它轉染試劑,，對于我們8000bp的質粒DNA基本轉染后都沒有熒光信號；師兄在中山大學的同學給我們推薦了他們實驗室用Zeta Life Advanced DNA RNA貨號AD600050轉染raw 264.7細胞經(jīng)驗分享,。

按照中山大學師兄給出的方法并結合我實驗室情況我把自己在6孔板轉染raw 264.7細胞的相關經(jīng)驗整理如下,，希望對你轉染raw 264.7細胞有一定的幫助，下面是我*用轉染raw 264.7細胞的熒光和細胞明場圖片,，后期進一步優(yōu)化后的新圖片我也會隨后呈上：
一,、質粒DNA準備

1、質粒DNA濃度700ng/ul（注意：①溶解于無菌雙蒸水或超純水,；②無內毒素）,，我用QIAGEN試劑盒除去的內毒素

二,、操作流程

1,、先將細胞接種到細胞培養(yǎng)板，細胞匯合度在70%左右,，再進行轉染,。

2,、復合物制備：將質粒DNA與Zeta Life Advanced Transfection Reagent貨號AD600050轉染試劑按照1:1（12ug:12ul）關系直接混合，用移液器吹吸10-15次混勻,，室溫靜止10-15分鐘,。

3、將復合物加入*培養(yǎng)基的細胞培養(yǎng)板,，并輕輕混勻,，放入培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)（不建議把復合物加入到無血清的培養(yǎng)基里面，我后期會進一步摸索此條件）,。

4,、轉染24小時后對細胞進行正常換液。

5,、質粒DNA轉染48小時后熒光檢測轉染效率

三,、Zeta Life Advanced DNA RNA轉染試劑信息：

四,、注意事項：

1本轉染方法不適用在下面轉染試劑的轉染如：lipo3000、,FuGENE 6,、FuGENE HD,、Effectene等轉染試劑,；

2細胞培養(yǎng)基：Zeta Life公司 z7181-500胎牛血清，Gibco公司DMEM;