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裸鼠皮下成瘤實(shí)驗(yàn)介紹2024年已更新

裸鼠腫瘤模型

 

無胸腺裸鼠（Nude Mouse,，簡(jiǎn)稱裸鼠）目前已成為醫(yī)學(xué)生物學(xué)研究領(lǐng)域中*的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型，它是先天性胸腺缺陷的突變小鼠,，裸鼠接種成活的腫瘤對(duì)化療藥物的敏感性與臨床所見十分相近,。根據(jù)腫瘤細(xì)胞的特性和接種細(xì)胞的量，一般皮下成瘤的周期為1-2個(gè)月,。腫瘤大小測(cè)量一般為1周兩次,，游標(biāo)卡尺測(cè)量腫瘤最長(zhǎng)和最短部位，腫瘤不宜生長(zhǎng)過大,，一般不要超過1000mm3,。

 

 裸鼠腫瘤模型實(shí)驗(yàn)步驟

1,、細(xì)胞的狀態(tài)是成瘤實(shí)驗(yàn)的關(guān)鍵,，所以細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)一定要好，取處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞,，細(xì)胞達(dá)80-90%左右密度為宜,。收集細(xì)胞前一天晚上更換新鮮培養(yǎng)基。

 

2,、胰酶消化細(xì)胞后用預(yù)冷的PBS洗兩遍,，目的為去除細(xì)胞中的血清。

 

3,、用PBS或者無血清培養(yǎng)基吹打細(xì)胞沉淀至合適的濃度,，一般皮下瘤接種的細(xì)胞量為1-5×10^6個(gè)細(xì)胞/支，接種體積為0.1ml,，因此細(xì)胞懸液的濃度為1-5×10^7個(gè)細(xì)胞/ml,。

 

4、細(xì)胞消化后應(yīng)盡快接種到裸鼠皮下,，一般盡量在半小時(shí)內(nèi)完成,，途中將細(xì)胞懸液放在冰上降低細(xì)胞的代謝。

 

5,、選擇的裸鼠一般在5-8周齡,，體重18-20g左右,，種植部位選擇血供豐富區(qū)域，如腋窩中后部,、腹股溝中上部,。

 

6、接種前用槍將細(xì)胞懸液充分的吹散,，防止細(xì)胞成團(tuán)而降低細(xì)胞成活率,。

 

7、接種時(shí),，針頭在皮下進(jìn)針深一點(diǎn),，約1cm深，減少注射后細(xì)胞懸液從針眼溢出,。

 

8,、如何抓牢裸鼠?左手拇指和食指捏緊裸鼠頸背部皮膚，小拇指夾住裸鼠尾巴,。

 

9,、接種后一周左右可以見到皮下開始出現(xiàn)腫塊。

 

10,、根據(jù)腫瘤細(xì)胞的特性和接種細(xì)胞的量,，一般皮下成瘤的周期為1-2個(gè)月。腫瘤不宜生長(zhǎng)過大,，一般不要超過1000mm3 ,，腫瘤負(fù)荷過大常常會(huì)以違背動(dòng)物倫理而被雜志社刁難(因?yàn)檫@個(gè)問題悲慘地被plos one拒過稿）。

 

11,、腫瘤大小測(cè)量一般為1周兩次,，游標(biāo)卡尺測(cè)量腫瘤最長(zhǎng)和最短部位。V=1/2*a*b2 (a為長(zhǎng)軸,，b為短軸),。

 

12、皮下瘤取下后一部分凍液氮用作以后提蛋白和RNA,，一部分福爾馬林固定用做免疫組化,、免疫熒光等