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Nu-16S01

試劑盒應(yīng)用

本試劑盒主要用于細菌16S rDNA 的快速檢測,，無需經(jīng)過繁瑣的基因組DNA 提取純化,，取樣后直接PCR 擴增即可獲得16S rDNA 信息,，通過比對16S 片段序列,，終獲得細菌種屬信息。本試劑盒可以檢測量低至104 個/mL 個細菌,，對難培養(yǎng),、珍貴樣本、表型不能鑒定的未知細菌快速擴

增尤為方便,。使用本試劑盒無需提取純化,，可直接對菌斑、甘油菌或?qū)?shù)菌進行檢測,，從而大大縮短了檢測時間,。試劑盒中提供的16S PCR Premix 已包含有染料，PCR 結(jié)束后直接進行瓊脂糖凝膠電泳,，PCR 產(chǎn)物可直接進行測序分析,。

本產(chǎn)品僅供研究使用，不可用于臨床,、食品,、化妝品等域。

保存條件

-20oC 保存,。使用時請置于冰上,。

使用方法

1、樣本準備：

1）菌液：取對數(shù)期菌液1-3 μL 加入PCR 反應(yīng)體系中,。

2）甘油菌：取1μL 菌液加入PCR 反應(yīng)體系中,。

3）單菌落：無菌吸頭或者無菌牙簽挑取單個菌落置于500 μL 無菌生理鹽水中，渦旋混合均勻,，取

1-3 μL 加入PCR 反應(yīng)體系中,。

2、推薦PCR 反應(yīng)體系

3,、按照以下方法設(shè)定PCR 反應(yīng)

4,、瓊脂糖凝膠電泳

使用1%瓊脂糖凝膠進行電泳,，不同菌株電泳片段稍微差別，一般為1.5kb 左右,。

5,、PCR 產(chǎn)物回收和測序

使用切膠回收試劑盒進行回收，并使用以下推薦引物進行測序,。將DNA 測序結(jié)果與NCBI 數(shù)據(jù)

庫進行比對,，確定細菌種類。

注意事項

1,、超凈臺中操作,，應(yīng)佩戴無菌手套，穿實驗服,，操作用75%乙醇對實驗器具進行消毒,。

2、使用無菌移液吸頭和離心管,，開蓋務(wù)必輕柔,，減少氣溶膠污染。

3,、盡可能使用2 次純化細菌,，以提高測序效率。