化工儀器網(wǎng)
技術(shù)文章
Azaood公司All-in-One RT SuperMix for qPCR (with dsDNase)產(chǎn)品介紹
閱讀：593 發(fā)布時(shí)間：2023-11-13貨號(hào)：AZ00003
儲(chǔ)運(yùn)條件
-20℃
產(chǎn)品組成
產(chǎn)品簡(jiǎn)介
All-in-One RT SuperMix for qPCR(with dsDNase) 是一款便捷,、減少污染的高質(zhì)量一鏈cDNA 合成試劑盒,，包含M-MLV GIIIReverse Transcriptase 及其反應(yīng)Buffer,、RNA 酶抑制劑,、dNTPs,Oligo(dT)20VN 和隨機(jī)引物等一鏈cDNA 合成所需的所有組分,，僅需加入RNA 模板和水即可開始反應(yīng)。All-in-One RT SuperMix for qPCR(withdsDNase) 作為升后的一鏈cDNA 合成試劑盒,，15 分鐘內(nèi)長(zhǎng)可獲得12 kb cDNA,，產(chǎn)物可用于qPCR、普通PCR 等實(shí)驗(yàn),。從組織或細(xì)胞中提取的RNA 往往殘留基因組DNA 污染,，如果反轉(zhuǎn)錄不做去除處理，下游進(jìn)行qPCR 反應(yīng)時(shí)基因組DNA 與cDNA會(huì)同時(shí)進(jìn)行擴(kuò)增,，尤其是引物設(shè)計(jì)在同一外顯子上時(shí),，影響定量準(zhǔn)確性。本試劑盒所采用的dsDNase 能夠特異性消化雙鏈DNA 或DNARNA雜合雙鏈中的DNA,，并且具有熱敏感性,，在逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)溫度下即可快速不可逆地失活。與傳統(tǒng)使DNase I 去除基因組DNA 污染的方法相比,，dsDNase 無(wú)需額外加入EDTA 進(jìn)行失活,，不僅節(jié)省實(shí)驗(yàn)時(shí)間，而且降低了對(duì)逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)的抑制,?？梢罁?jù)基因組DNA 污染嚴(yán)重程度,，選擇去基因組DNA 污染與反轉(zhuǎn)錄分開進(jìn)行，或者去基因組DNA 污染與反轉(zhuǎn)錄一步進(jìn)行的操作方法,。
使用方法
針對(duì)基因組DNA 含量低的RNA 樣品（推薦方案）
① 于冰上配制如下反應(yīng)體系：
a. 推薦使用試劑盒提取的高質(zhì)量RNA 作為模板,。
② 輕柔吸打混勻，瞬離,；
③ 37℃溫育2 min，以去除基因組DNA 污染,；
④ 55℃溫育15 min,；
⑤ 反應(yīng)結(jié)束后，85℃溫育2 min 以終止反應(yīng),；
⑥ 迅速將獲得的cDNA 置于冰上,，用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)；或立即保存于-20℃,。
針對(duì)基因組DNA 含量高RNA 樣品
1. 基因組DNA 污染去除
① 于冰上配制如下反應(yīng)體系：
a. 推薦采用試劑盒提取的RNA 作為模板,。
② 輕柔吸打混勻，瞬離,；
③ 37℃溫育2 min,，以去除基因組DNA 污染；
注：若RNA 中基因組DNA 污染嚴(yán)重,，可適當(dāng)延長(zhǎng)37℃溫育時(shí)間至5 min,。
④ 65℃溫育2 min，使dsDNase 失活,，然后置于冰上,。
2. diyi鏈cDNA 合成
① 于冰上配制如下反應(yīng)體系：
② 輕柔吸打混勻，瞬離,；
③ 50℃溫育15 min,；
注：若目標(biāo)RNA 不含Poly(A) 結(jié)構(gòu)，可預(yù)先25℃溫育10 min,。
④ 反應(yīng)結(jié)束后,，85℃溫育2 min，以終止反應(yīng),；
⑤ 將獲得的cDNA 溶液置于冰上,，用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
注：cDNA 溶液置于-20℃儲(chǔ)存,，建議不超過1 周,；置于-80℃可儲(chǔ)存。
注意事項(xiàng)
預(yù)混液中已經(jīng)包含Oligo(dT)20VN 和隨機(jī)引物,，不僅適用于包含Poly(A) 結(jié)構(gòu)的真核生物mRNA,，也適用于不含Poly(A) 結(jié)構(gòu)的原核生物RNA,、真核生物rRNA 和tRNA 等模板，但不適用于miRNA 等小RNA 模板,。
美國(guó)Azaood公司成立于2004年,，是一家開發(fā)和生產(chǎn)用于生命科學(xué)研究、診斷和生物技術(shù)應(yīng)用的高質(zhì)量純化酶,、蛋白質(zhì),、核酸和細(xì)胞分離試劑盒、胎牛血清的行業(yè)導(dǎo)者,；Azood公司是通過了ISO9001認(rèn)證的主要制造商,，可以滿足從研究到大規(guī)模批量生物加工和OEM應(yīng)用與要求的公司。