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美國Azaood公司All-in-One RT SuperMix for qPCR AZ00003產(chǎn)品介紹
閱讀：699 發(fā)布時間：2023-11-10貨號：AZ00003
儲運條件
-20℃
產(chǎn)品組成
產(chǎn)品簡介
All-in-One RT SuperMix for qPCR(with dsDNase) 是一款便捷,、減少污染的高質(zhì)量一鏈cDNA 合成試劑盒,，包含M-MLV GIIIReverse Transcriptase 及其反應Buffer、RNA 酶抑制劑,、dNTPs,Oligo(dT)20VN 和隨機引物等一鏈cDNA 合成所需的所有組分,，僅需加入RNA 模板和水即可開始反應。All-in-One RT SuperMix for qPCR(withdsDNase) 作為升后的一鏈cDNA 合成試劑盒,，15 分鐘內(nèi)長可獲得12 kb cDNA,，產(chǎn)物可用于qPCR、普通PCR 等實驗,。從組織或細胞中提取的RNA 往往殘留基因組DNA 污染，如果反轉(zhuǎn)錄不做去除處理,，下游進行qPCR 反應時基因組DNA 與cDNA會同時進行擴增,，尤其是引物設(shè)計在同一外顯子上時，影響定量準確性,。本試劑盒所采用的dsDNase 能夠特異性消化雙鏈DNA 或DNARNA雜合雙鏈中的DNA,，并且具有熱敏感性，在逆轉(zhuǎn)錄反應溫度下即可快速不可逆地失活,。與傳統(tǒng)使DNase I 去除基因組DNA 污染的方法相比,，dsDNase 無需額外加入EDTA 進行失活，不僅節(jié)省實驗時間,，而且降低了對逆轉(zhuǎn)錄反應的抑制,。可依據(jù)基因組DNA 污染嚴重程度,，選擇去基因組DNA 污染與反轉(zhuǎn)錄分開進行,，或者去基因組DNA 污染與反轉(zhuǎn)錄一步進行的操作方法。
使用方法
針對基因組DNA 含量低的RNA 樣品（推薦方案）
① 于冰上配制如下反應體系：
a. 推薦使用試劑盒提取的高質(zhì)量RNA 作為模板,。
② 輕柔吸打混勻,，瞬離；
③ 37℃溫育2 min,，以去除基因組DNA 污染,；
④ 55℃溫育15 min；
⑤ 反應結(jié)束后,，85℃溫育2 min 以終止反應,；
⑥ 迅速將獲得的cDNA 置于冰上,，用于后續(xù)實驗；或立即保存于-20℃,。
針對基因組DNA 含量高RNA 樣品
1. 基因組DNA 污染去除
① 于冰上配制如下反應體系：
a. 推薦采用試劑盒提取的RNA 作為模板,。
② 輕柔吸打混勻，瞬離,；
③ 37℃溫育2 min,，以去除基因組DNA 污染；
注：若RNA 中基因組DNA 污染嚴重,，可適當延長37℃溫育時間至5 min,。
④ 65℃溫育2 min，使dsDNase 失活,，然后置于冰上,。
2. diyi鏈cDNA 合成
① 于冰上配制如下反應體系：
② 輕柔吸打混勻，瞬離,；
③ 50℃溫育15 min,；
注：若目標RNA 不含Poly(A) 結(jié)構(gòu)，可預先25℃溫育10 min,。
④ 反應結(jié)束后,，85℃溫育2 min，以終止反應,；
⑤ 將獲得的cDNA 溶液置于冰上,，用于后續(xù)實驗。
注：cDNA 溶液置于-20℃儲存,，建議不超過1 周,；置于-80℃可儲存。
注意事項
預混液中已經(jīng)包含Oligo(dT)20VN 和隨機引物,，不僅適用于包含Poly(A) 結(jié)構(gòu)的真核生物mRNA,，也適用于不含Poly(A) 結(jié)構(gòu)的原核生物RNA、真核生物rRNA 和tRNA 等模板,，但不適用于miRNA 等小RNA 模板,。
美國Azaood公司成立于2004年，是一家開發(fā)和生產(chǎn)用于生命科學研究,、診斷和生物技術(shù)應用的高質(zhì)量純化酶,、蛋白質(zhì)、核酸和細胞分離試劑盒,、胎牛血清的行業(yè)導者,；Azood公司是通過了ISO9001認證的主要制造商，可以滿足從研究到大規(guī)模批量生物加工和OEM應用與要求的公司,。