技術(shù)文章
生物實(shí)驗(yàn)服務(wù)-蛋白互作-免疫共沉淀(Co-IP)實(shí)驗(yàn)步驟介紹
閱讀:926 發(fā)布時(shí)間:2023-9-27免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation, Co-IP):
蛋白質(zhì)是細(xì)胞活性和功能的執(zhí)行者,,且蛋白質(zhì)是依靠蛋白間相互作用執(zhí)行功能的,,因而研究蛋白的相互作用對(duì)于研究細(xì)胞活性和功能,、解釋生命過(guò)程和現(xiàn)象具有重要意義,。
實(shí)驗(yàn)原理
免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation,,CoIP)是研究蛋白-蛋白間相互作用的經(jīng)典方法,,屬于免疫沉淀技術(shù)的一類,常被用于鑒定特定蛋白復(fù)合物的中未知蛋白組分,。免疫共沉淀的設(shè)計(jì)理念是,,假設(shè)一種已知蛋白是某個(gè)大的蛋白復(fù)合物的組成成員,,那么利用這種蛋白的特異性抗體,就可能將整個(gè)蛋白復(fù)合物從溶液中“拉"下來(lái)(常說(shuō)的“pull-down"),,進(jìn)而可以用于鑒定這個(gè)蛋白復(fù)合物中的其他未知成員,。免疫共沉淀的特點(diǎn)可以概括為兩點(diǎn),是天然狀態(tài),,第二是蛋白復(fù)合物,。
實(shí)驗(yàn)方法
1. 預(yù)清洗beads。
2. 取蛋白樣品分成input,,igG組和目標(biāo)抗體組進(jìn)行IP,。
3. 取出預(yù)清洗的beads. 加入 IP用的目標(biāo)抗體和igG在rotator進(jìn)行IP反應(yīng)過(guò)夜。
4. IP過(guò)夜后收取蛋白
5. 通過(guò)SDS-PAGE和Western Blot或質(zhì)譜進(jìn)行檢測(cè),。
結(jié)果展示
實(shí)驗(yàn)周期及交付標(biāo)準(zhǔn)
1. 實(shí)驗(yàn)周期:3-5周
2. 交付標(biāo)準(zhǔn):完整實(shí)驗(yàn)報(bào)告(試劑,、耗材、實(shí)驗(yàn)步驟),、原始數(shù)據(jù)等
需確認(rèn)信息
1. 目的蛋白及信息
2. 樣本種屬及類型
3.是否提供一抗