試劑盒應(yīng)用

本試劑盒可用于動(dòng)物組織或細(xì)胞DNA 的克隆,、重組細(xì)胞株鑒定,、DNA 病毒鑒定,、STR 鑒定等,。依托NuSmart®平臺(tái)升級(jí)TC-DNA Lysis 配方，10 分鐘內(nèi)裂解各種細(xì)胞和組織,。使用過(guò)程中無(wú)需大量樣本,、無(wú)需反復(fù)離心，從而獲得高質(zhì)量的DNA 模板,。該試劑盒可以對(duì)單個(gè)細(xì)胞或10 個(gè)病毒粒子進(jìn)行檢測(cè)。

本試劑盒僅供研究使用,，不可用于臨床,、食品、化妝品等領(lǐng)域,。

試劑盒組成

保存條件

-20oC 保存,。

TC-DNA Lysis 和2×TaqMix(With Dye)長(zhǎng)期使用可4℃保存,，避免反復(fù)凍融。

需要準(zhǔn)備

金屬恒溫浴,、離心機(jī),、PCR 儀

使用方法

一、不同樣品的處理方法

1. 組織液的處理

（1）組織液包括組織研磨液,、細(xì)胞懸液,、全血、血清,、拭子處理液等,。取10 μL組織液※置于離心管中。

※：棉簽放入500μL生理鹽水或無(wú)菌水中,，浸泡5-10min,，用力擠壓后取10 μL置于離心管中。

（2）加入20 μL TC-DNA Lysis,。

（3）充分混勻,。

（4）置于55℃作用5 分鐘。溶液即為DNA 模板,。

2. 組織塊的處理

（1）用眼科剪剪取1-2mm 的組織塊,，并將組織塊剪成肉泥狀。

（2）加入20 μL TC-DNA Lysis,。

（3）充分混勻,。

（4）置于55℃作用5 分鐘。

（5）10,000rpm 離心60 秒取上清,。上清即為DNA 模板,。

二、推薦PCR 反應(yīng)體系

三,、按照以下方法設(shè)定PCR 反應(yīng)

注意事項(xiàng)

一,、試劑盒使用前注意事項(xiàng)

（1）所有試劑應(yīng)按照溫度儲(chǔ)存。請(qǐng)勿反復(fù)凍融,。

（2）使用前需要對(duì)操作區(qū)進(jìn)行消毒,，消毒方式可以采用75%乙醇或核酸消除劑等。耗材均使用商品化的無(wú)酶耗材,。

（3）TC-DNA Lysis 采用配方,，若出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)小球狀物質(zhì)屬于正常現(xiàn)象,。

（4）TC-DNA Lysis 頻繁使用,，可在4℃保存。長(zhǎng)期不使用可放-20℃保存。

二,、樣本注意事項(xiàng)

（1）細(xì)胞無(wú)需離心,，在含/不含血清的環(huán)境中均可直接使用。

（2）擴(kuò)增2kb 以內(nèi)片段,，細(xì)胞樣品濃度不超過(guò)1000 個(gè)細(xì)胞,。如若擴(kuò)增片段超過(guò)2kb，可適當(dāng)提高細(xì)胞濃度,。

（3）不同組織使用不同的眼科剪和眼科鑷進(jìn)行處理,，防止交叉污染導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果偏差。

（4）組織樣本僅需要采集1-2mm,。

三,、試劑盒使用過(guò)程中注意事項(xiàng)

（1）PCR 過(guò)程中推薦使用陰性對(duì)照和陽(yáng)性對(duì)照。

（2）整個(gè)過(guò)程中使用的吸頭,、離心管等耗材應(yīng)丟棄在含有75%乙醇或核酸消除劑的容器中,，減少環(huán)境污染。

（3）2×Master TaqMix(With Dye)已包含染料,，可在反應(yīng)結(jié)束后直接進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳,。

（4）PCR 產(chǎn)物3’末端含有A，可直接進(jìn)行TA 克隆,。

四,、試劑盒使用后注意事項(xiàng)

（1）TC-DNA Lysis 處理后的DNA 模板可在-20℃保存至少1 個(gè)月。避免反復(fù)凍融,，防止基因組斷裂,。

（2）PCR 反應(yīng)完成后，嚴(yán)禁在實(shí)驗(yàn)區(qū)開(kāi)蓋,。應(yīng)在污染區(qū)進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳,，防止氣溶膠污染。

（3）為防止試劑盒污染,，請(qǐng)勿將不同批號(hào)試劑盒混用,。

檢測(cè)實(shí)例

來(lái)源范圍

細(xì)胞 293T、A549,、Vero,、PK15、Sp2/0,、HCT-116,、Marc145、ST,、siHa,、MCF-7

人 頭發(fā),、唾液,、咽拭子,、指甲

小鼠 心、肝,、脾,、肺、腎,、腦,、脊柱、胃,、大腸,、小腸、膽囊,、尾巴,、腳趾、皮,、

耳朵,、肌肉、EDTA 抗凝血,、肝素鈉抗凝血,、枸櫞酸鈉抗凝血

豬 心、肝,、脾,、肺、腎,、腦,、淋巴結(jié)、咽拭子,、唾液,、精液、全血,、血清

雞 心,、肝、脾,、肺,、胃

亞洲鯽魚(yú) 魚(yú)鰭、魚(yú)泡,、魚(yú)鱗,、魚(yú)籽

常見(jiàn)問(wèn)題解析