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3D類器官培養(yǎng)基質(zhì)膠B-P-00003小鼠皮下成瘤實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備程序
閱讀：947 發(fā)布時(shí)間：2022-2-8小鼠皮下成瘤實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備程序
A、細(xì)胞房內(nèi)材料準(zhǔn)備、試劑制備及步驟
(1) 材料準(zhǔn)備:
1. 冰盒,、2. 37 ℃ 水浴槽、3. C緩沖溶液(10X),、4. 無血清細(xì)胞培養(yǎng)液 (例如: 無血清DMEM,，DMEM-F12等，不可用 PBS ),、5. A膠 (2X),、6. 細(xì)胞培養(yǎng)液、7. 23-26G針頭,、8. 1 mL針筒,、9. 細(xì)胞。
(2) 試劑制備:
1,、C緩沖溶液 (0.5 X) 制備 : 使用 37 ℃ 水浴回溫的無血清細(xì)胞培養(yǎng)液 (例如: 無血清DMEM或DMEM-F12等,，不可用 PBS ) 稀釋 C緩沖溶液 (10 X) 至 C緩沖溶液 (0.5 X), 即體積稀釋20倍。使用前放置37度水浴槽,。(例如:1 mL C緩沖溶液 (10 X) + 19 ml 無血清DMEM; 若未使用完畢,，可先保存于4 ℃ 冰箱, 保存一周)
2、A膠 (1X) 制備 : 將 A膠 (2X) (貨號(hào):B-P-00003-A) 置于37 ℃ 水浴槽回溫10分鐘,，確認(rèn)*溶解,。再將 37 ℃ 水浴回溫的無血清細(xì)胞培養(yǎng)液取 0.5 mL， 加至 37 ℃ 已溶解的 0.5 mL A膠 (2X),，配置成 1 mL 的 A膠 (1X),。使用前置于37度,，可降低黏度。 (單次使用,，勿重復(fù)冷凍解凍 A膠 (1X) )
(3)步驟:
1,、取細(xì)胞溶液離心后收集細(xì)胞沉淀，與C緩沖溶液 (0.5 X) 均勻混合使細(xì)胞濃度為3*106 cells/mL,。
2,、A膠 (1X) 與步驟 1 含 C緩沖溶液 (0.5 X) 的細(xì)胞系懸浮液，按照 2:1 比例均勻混合配置,，細(xì)胞懸浮液最終濃度為 106 cells/mL,。使用前置于37℃，可降低黏度,。 (C緩沖溶液用于A膠凝膠反應(yīng),，例如0.5ml C 緩沖溶液(0.5 X)含細(xì)胞 加入 1ml A膠 (1X) 混合成1.5ml 的注射液)
3、選用 23-26 G 的針頭 (建議選用 24 G) 及 1 mL 針筒,，抽取 步驟2 A膠與 C緩沖溶液的細(xì)胞混合液至所需注射體積 (例如:0.2-0.6 mL) ,。室溫37℃至20℃操作抽取。 (若抽取時(shí)發(fā)生塞針狀態(tài),，可先把針頭拔掉,，以針筒進(jìn)行抽取，建議一次抽取配置好所需針筒數(shù)量,，避免步驟2 溶液過度凝膠,，發(fā)生塞針)
4、將抽取好步驟 3 的針筒,，帶入動(dòng)物房, 若短時(shí)間無法施打建議置于冰上,。
B、動(dòng)物房內(nèi)材料準(zhǔn)備及步驟
(1)材料準(zhǔn)備:
1. 含 A膠與 C緩沖溶液的細(xì)胞混合液的針筒,、2. 皮膚消毒劑 (例如 : 酒精),、
3. 手套、4. 實(shí)驗(yàn)小鼠,、5. 麻醉小鼠的試劑
(2)步驟:
1,、室溫下可直接注射。若是置于冰盒上的針筒,，回到室溫后,，待液化再進(jìn)行注射。 含 A膠與 C緩沖溶液的細(xì)胞混合液的針筒,，以皮下注射方式,，注射實(shí)驗(yàn)所需的體積至實(shí)驗(yàn)鼠 (建議皮下注射量為 0.2 mL，實(shí)際狀況依需求而定)。(針筒放冰上注射阻力會(huì)上升, 放室溫會(huì)液化注射阻力小,。注射時(shí)若因凝膠緣故而阻力變大,，需緩慢注射避免針頭噴落)
注1 : 注射體積可依不同實(shí)驗(yàn)?zāi)康淖稣{(diào)整，若為皮下血管生成研究注射體積需至少0.5 mL以上,。
注2 : 此步驟依實(shí)驗(yàn)需求可執(zhí)行或不執(zhí)行,，若需呈現(xiàn)明顯的皮下注射隆起效果，可調(diào)整2.試劑制備將C緩沖溶液 (10 X) 稀釋15倍,，變成C緩沖溶液 (0.66 X),，再執(zhí)行后續(xù)成膠實(shí)驗(yàn)；提高C濃度,，可提高膠體硬度,。
2、培養(yǎng)一至三周后觀察量測接種的腫瘤尺寸,。
注3 : 若為血管生成研究,，應(yīng)注射含VEGF及heparin的A膠，以促進(jìn)血管生成,。約三天后,，可摘取含有新血管生成的腫瘤組織。