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小鼠單核巨噬細胞白血病細胞（RAW264.7）是通過Abelson鼠白血病病毒誘導BALB/c小鼠產(chǎn)生腫瘤后得到的細胞株,。其在醫(yī)學研究中應用十分普遍，是許多白血病相關(guān)研究模型的常用細胞株,，在微生物學,、免疫學等研究中也十分常用。但RAW264.7細胞形態(tài)和分化狀態(tài)多變,，在實際培養(yǎng)中較難把握,，給科研工作帶來了一定困難；且RAW264.7細胞很難轉(zhuǎn)染,，許多研究者表示Lipofectamine 2000根本轉(zhuǎn)不進去,，或者僅有不到10%的轉(zhuǎn)染效率。因此RAW264.7細胞的培養(yǎng)及轉(zhuǎn)染方法就很值得去探討,，本文就這些方面進行介紹,，以供科研工作者借鑒。

一,、RAW264.7細胞的形態(tài)特征

很多人養(yǎng)RAW264.7細胞時發(fā)現(xiàn)自己的細胞出現(xiàn)偽足,；就連ATCC的描述也稱RAW264.7細胞形態(tài)多樣，可有圓形,、類圓形,，以及長出偽足的長梭形、多邊形,，可單核可多核,。而實際，有偽足的情況是RAW264.7細胞受到外界刺激進行了分化,，是細胞衰老,、分化的表現(xiàn)；RAW264.7細胞的“較佳”形態(tài)應是較小的單核圓形細胞

二,、RAW264.7細胞的培養(yǎng)條件

RAW264.7細胞的培養(yǎng)環(huán)境與一般貼壁細胞并無差異,。即培養(yǎng)箱溫度為37℃，CO2濃度為5%,。ATCC推薦的培養(yǎng)基為DMEM+10%的胎牛血清,；實際上，經(jīng)研究者們實驗發(fā)現(xiàn)高糖型DMEM培養(yǎng)的RAW264.7細胞傳代后貼壁更快,、細胞生長速度更快,。因此，推薦使用高糖型DMEM,，FBS濃度為10%,，作為RAW264.7細胞的培養(yǎng)基,。

三、RAW264.7細胞的傳代

關(guān)于RAW264.7細胞的傳代方法,，ATCC推薦使用細胞刮刀,。也可采用0.25%的胰酶消化或采用彎嘴吸管吹打等方法。采用細胞刮刀進行傳代時,，細胞能較大限度被收集起來,，但會對細胞造成機械性損傷、影響細胞形態(tài)及貼壁時間等,。采用胰酶消化時,，由于RAW264.7細胞貼壁較牢，消化時間就較長,。但消化時間點不易把握,，易消化過度，對細胞生長造成抑制,。

因此,，推薦使用彎嘴吸管吹打進行傳代。具體做法是,，當細胞達到傳代密度時,，先棄去培養(yǎng)基，用預冷的PBS洗滌兩次,，用彎嘴吸管吸取培養(yǎng)基,，均勻、稍用力吹打瓶底,，即可將細胞吹打下來（吹不下來的就不要了）,，離心后重懸即可分瓶培養(yǎng)。2 h后可見細胞貼壁,。

由于RAW264.7細胞生長速度較快,，一般1-2d換液1次，密度長至60%-70%左右即可傳代,，傳代比例可為1:3-1:6,。若傳代間隔太久，細胞生長密度過大,，細胞也容易發(fā)生分化,，出現(xiàn)長偽足的多形細胞。

四,、RAW264.7細胞的凍存及復蘇

RAW264.7細胞的凍存及復蘇方法與一般貼壁細胞并無較大差別,。但由于RAW264.7細胞對外界刺激較敏感,，對營養(yǎng)條件要求較高,，許多人建議降低DMSO的濃度,，增加FBS血清的濃度。因此凍存液的推薦配方為5% DMSO和20% FBS的培養(yǎng)基（小鼠單核巨噬細胞白血病細胞的培養(yǎng)及其在誘導破骨細胞中的應用,，許丹等,，中國骨質(zhì)疏松雜志，2016, 10, 22, 10）,。

五,、RAW264.7細胞的轉(zhuǎn)染

（一）以往轉(zhuǎn)染數(shù)據(jù)

RAW264.7細胞是一種巨噬細胞，有很強的貼壁性和偽足產(chǎn)生性,，其轉(zhuǎn)染較難,，一般采用電轉(zhuǎn)或慢病毒穩(wěn)轉(zhuǎn)的方法。有研究者對RAW264.7細胞用幾種不同的轉(zhuǎn)染方法進行處理,，對轉(zhuǎn)染效率進行比較,。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染（Lipofectamine 2000, Invitrogen）效率較低,，僅為12.17±1.53%,，慢病毒轉(zhuǎn)染效率較高，可達34.75 ± 5.30%,，羅氏轉(zhuǎn)染（X-treme GENE HP DNA Transfection Reagent, Roche）和電穿孔轉(zhuǎn)染效率分別為16.52 ± 3.86%和15.73 ± 3.29%（巨噬細胞RAW264.7不同轉(zhuǎn)染方法的比較,，李亞等，生物技術(shù),，2014, 24, 2）,。

（二）高效轉(zhuǎn)染試劑

既然RAW264.7細胞這么難轉(zhuǎn)染，實驗還得繼續(xù),，那怎么辦呢,？

不要擔心，現(xiàn)在ZETA LIFE新推出一款Advanced系列高效DNA,、RNA轉(zhuǎn)染試劑,。其廣泛適用于貼壁細胞和懸浮細胞的轉(zhuǎn)染，可轉(zhuǎn)DNA,、RNA,，也可共轉(zhuǎn)染，還可進行小動物活體轉(zhuǎn)染,。

這一款轉(zhuǎn)染試劑有以下幾個特點：

1.適用細胞廣

 廣泛用于293T,，9L，A172, A375, A549, COS7, CHO-K1, C6S, C2C12, NIH3T3, RG2, T98G, U87, U118, MDCK, MCF-7, HT1080, HEK, H4, RAW264.7等多種細胞系,。

2.細胞毒性低

其細胞存活率可高達98%,，平均細胞存活率可達80%。

3.轉(zhuǎn)染效率高

其轉(zhuǎn)染效率可高達96%,，平均轉(zhuǎn)染效率可達70%,。

（三）Advanced系列高效DNA,、RNA轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染質(zhì)粒進RAW264.7的實例（來自實驗者的實際數(shù)據(jù)）

由上圖可明顯看出Advanced系列高效DNA、RNA轉(zhuǎn)染試劑對RAW264.7轉(zhuǎn)質(zhì)粒的轉(zhuǎn)染效率高達95%以上,，且細胞存活率較高,。

相信Advanced系列高效DNA、RNA轉(zhuǎn)染試劑 將是您對的選擇,，希望能為您的研究助力,。