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一、 實驗儀器與試劑

表格一：實驗儀器

儀器	廠家	型號
細胞培養(yǎng)箱	Thermo Scientific	HERA cell CO2
激光共聚焦顯微鏡	Leica	TCS SP5

表格二：試劑

試劑	廠家
細胞培養(yǎng)基	Gibco
PBS (0.1 M, pH 7.4)	自配
4 %多聚甲醛溶液	索來寶
BSA	Sigma
Triton-x-100	生工生物
FITC 標記羊抗兔熒光二抗	Santa Cruz
DAPI	碧云天

二,、 實驗步驟

制作細胞爬片,根據(jù)實驗方案進行加樣操作,；

反應 24h 后，棄原有培養(yǎng)液,， PBS 洗 1 次,；

4％的多聚甲醛 4 度固定 15 分鐘,，PBS 洗 2 次,，5 分鐘/次；

4. 加入 0.1％的 Triton-x-100,，室溫孵育 15 分鐘,；

5. PBS 洗 3 次，5 分鐘/次,；

6. 10％BSA 封閉 30 分鐘,；

加入一抗 50μL（稀釋度為 1：100），4℃過夜孵育,；

第二天復溫 30min,，PBS 洗 3 次，5 分鐘/次,；

每組分別加入 FITC 標記羊抗兔熒光二抗 50μL（稀釋度為 1：500）,，37℃培養(yǎng) 30 分鐘；

PBS 洗 3 次,，每次 5 分鐘,；

11. DAPI 染色 5 分鐘,；

PBS 洗 3 次，每次 5 分鐘,；

在激光共聚焦顯微鏡上觀察（使用 405nm 和 488nm 的激發(fā)光源進行熒光檢測）,。  

三、 實驗結(jié)果