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流式細胞儀檢測A172細胞凋亡的實驗報告實驗報告書 

一,、 實驗儀器與試劑 

表格一：實驗儀器 

儀器	廠家	型號
細胞培養(yǎng)箱	Thermo Scientific	HERA cell CO2
低溫高速離心機	64R	BECKMAN
流式細胞儀	BD	FACS Calibur

 

表格二：試劑 

試劑	廠家
DMEM 培養(yǎng)液	Hyclone
胎牛血清	Gibco
無鈣、鎂 PBS 7.4 (0.1 M)	自配
Annexin V-FITC/PI 凋亡檢測試劑盒	BD

二,、 實驗步驟 

細胞培養(yǎng) 取對數(shù)生長期的 A172 細胞,，按 1*105個/mL 以 1mL 體積接種于 6 孔板內(nèi),。無抗生素培養(yǎng)液培養(yǎng)過夜,到轉(zhuǎn)染時使細胞達到 70％的匯合率。 

轉(zhuǎn)染 

將 12.5uL siRNA 溶于 387.5uL 無血清的 DMEM 中,混合均勻,。 

將 12.5uL Lipofectamine 2000 溶于 387.5uL 無血清的 DMEM 中,，混合均

勻。在室溫下孵育 5 分鐘,。 

將上述兩種混合物混合（總體積 800uL）,輕輕混合均勻在室溫下孵育

20 分鐘形成復(fù)合物,。 

在 6 孔板中每孔加入 800uL 復(fù)合物。十字法混合均勻,。 

細胞在 37℃,、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 6h 后棄上清液,并加入 10％胎牛血

清的 DMEM 培養(yǎng)液。 

染色 消化并離心收集細胞（1000rpm/min）后棄上清,，加入無鈣,、鎂 PBS 1mL 洗

2 次，離心后棄上清,。分別加入 100μL binding buffer,、5μL Annexin V-FITC 和 5μL

PI 溶液，室溫避光孵育 15min,。 

4. 檢測 

加入 400μL binding buffer 后以標準程序用流式細胞儀檢測,，汞激發(fā)波長

488nm，計數(shù) 1 萬個細胞,。 

三,、 實驗結(jié)果 

省略