能夠包載DNA、RNA等核酸類物質(zhì)的DOTAP大家了解嗎,？為何DOTAP會在包裹核酸尤其是制備轉(zhuǎn)染試劑領(lǐng)域得到如此廣的應(yīng)用呢,？DOTAP的安全性究竟如何呢？

提起DOTAP,，大家更多想到的是包載DNA、RNA等核酸類物質(zhì),，而不是像普通脂質(zhì)體那樣包載化療藥等化合物,。那么為何DOTAP會在包裹核酸尤其是制備轉(zhuǎn)染試劑領(lǐng)域得到如此廣的應(yīng)用呢？

| 中文名稱：DOTAP

| 商品名：DOTAP

| 貨號：002002

| 化學(xué)名稱：（2,3-二油?；?丙基）-三甲基銨-氯鹽,；(2,3-二油酰基-丙基)-三甲基氯化銨

| 分子式：C42H80NO4Cl    

| CAS號：132172-61-3

| 級別：藥用試劑級別

| 用途：陽離子脂質(zhì)體

| 結(jié)構(gòu)式：          

| 性狀：白色固體

| 純度：99%

| 分子量：698.56

| 熔點：35~38℃

| 保存條件：-20±5℃,，遮光密閉

| 注意事項：避免與強酸,、強堿、強氧化性物質(zhì)接觸

首先我們先了解下轉(zhuǎn)染,。轉(zhuǎn)染是真核細胞主動或者被動導(dǎo)入外源核酸片段而獲得新的表型的過程,，所以轉(zhuǎn)染試劑的作用就是將DNA等運輸至細胞內(nèi)。陽離子脂質(zhì)體因自身攜帶正電荷,，可與核酸結(jié)構(gòu)中帶負電的磷酸基團產(chǎn)生靜電作用相結(jié)合,，從而將DNA穩(wěn)定、高效的包裹。同時,，陽離子脂質(zhì)體也能被表面帶負電的細胞膜吸附,，再通過膜融合或細胞內(nèi)吞作用將DNA遞送入細胞內(nèi)發(fā)揮作用?；谕瑯拥脑?，很多研究也利用陽離子脂質(zhì)體包裹小核酸類藥物，如反義寡核苷酸,、干擾RNA等,。因陽離子脂質(zhì)體本身也有細胞毒性，會對實驗數(shù)據(jù)造成干擾,，因此在chu方設(shè)計時應(yīng)注意DOTAP的用量,，配合包封率以及zeta電位等指標甚至動物實驗進行優(yōu)化。

陽離子脂質(zhì)體的分類及應(yīng)用優(yōu)勢

根據(jù)包載的API不同,，可將陽離子脂質(zhì)體分為兩大類,，一類是包載以mRNA、siRNA為代biao的核酸類藥物的脂質(zhì)體,，是基因zhi療中研究zui多,、應(yīng)用zui廣的一種非病毒載體；另一類是包載如紫杉醇,、喜樹堿等小分子抗ai藥的脂質(zhì)體制劑,，具有腫liu新生血管靶向性，對ai癥也有雙重機制作用下的好療效,。

陽離子脂質(zhì)體作為非病毒載體有著以下這些優(yōu)勢：

保護zhi療基因在體內(nèi)循環(huán)中不被降解,。通過對脂質(zhì)體的表面基團進行特殊修飾后的陽離子脂質(zhì)體能很好地包封片段，促進復(fù)合物與細胞膜的融合,，增加DNA的攝取和表達,；

高xiao穿過細胞膜和核膜，轉(zhuǎn)染細胞,，使其表達/沉默基因,；

如果適應(yīng)癥為ai癥，則能夠選擇性的吸附于帶負電荷的新生腫liu血管內(nèi)皮細胞上,，抗ai效果更好,。

陽離子脂質(zhì)DOTAP的應(yīng)用

前面也說了，DOTAP是兩親分子,，主要由三部分組成：極性頭部(親水基團),、連接鍵、疏水尾部,。通過靜電作用與帶有負電荷的DNA分子相結(jié)合的是DOTAP的極性頭部,，通常由叔胺或季銨鹽構(gòu)成,，后來又研究出咪唑頭部、氨基酸頭部等,。其極性頭部對核酸分子的包載效率以及細胞毒性均有重要的影響,。chu方中DOTAP用量越大載藥量越大，但zeta電位過高細胞毒性也越大,，制劑安全性受影響,，兩者需平衡。學(xué)術(shù)部的同事曾做過小鼠實驗研究即毒性：當zeta電位高于+50mV時即有可能出現(xiàn)注射立即死亡現(xiàn)象,。對于包載化療藥物而言,，載藥并不依賴DOTAP，chu方中可添加其它中性磷脂如DSPC,、DPPC等,，使用劑量方面受限較小。

早先DOTAP應(yīng)用于商業(yè)化產(chǎn)品是轉(zhuǎn)染試劑,。DOTAP的極性頭部通過靜電作用與帶有負電荷的DNA分子穩(wěn)定結(jié)合,，兩者混合后可自發(fā)形成穩(wěn)定的復(fù)合物。這種轉(zhuǎn)染方法非常溫和,，可避免脂質(zhì)轉(zhuǎn)染或者其它方式轉(zhuǎn)染帶來的細胞毒性作用,，并且轉(zhuǎn)染效率高于其它的脂質(zhì)試劑。

目前DOTAP較為成功的應(yīng)用案例有紫杉醇陽離子脂質(zhì)體EndoTAG-1以及喜樹堿藥物的陽離子脂質(zhì)體EndoTAG-2,，其作為優(yōu)xiu的轉(zhuǎn)染試劑應(yīng)用也很廣,。RNA類藥物的效果與選用的陽離子脂質(zhì)材料密切相關(guān)，實驗中遇到問題的時候不妨多試幾種陽離子脂質(zhì)材料,。