能夠包載DNA、RNA等核酸類物質(zhì)的DOTAP大家了解嗎,？為何DOTAP會(huì)在包裹核酸尤其是制備轉(zhuǎn)染試劑領(lǐng)域得到如此廣的應(yīng)用呢,？DOTAP的安全性究竟如何呢？

提起DOTAP,，大家更多想到的是包載DNA,、RNA等核酸類物質(zhì)，而不是像普通脂質(zhì)體那樣包載化療藥等化合物,。那么為何DOTAP會(huì)在包裹核酸尤其是制備轉(zhuǎn)染試劑領(lǐng)域得到如此廣的應(yīng)用呢？

| 中文名稱：DOTAP

| 商品名：DOTAP

| 貨號(hào)：002002

| 分子式：C42H80NO4Cl    

| CAS號(hào)：132172-61-3

| 級(jí)別：藥用試劑級(jí)別

| 用途：陽(yáng)離子脂質(zhì)體

| 結(jié)構(gòu)式：          

| 性狀：白色固體

| 純度：99%

| 分子量：698.56

| 熔點(diǎn)：35~38℃

| 保存條件：-20±5℃,，遮光密閉

| 注意事項(xiàng)：避免與強(qiáng)酸,、強(qiáng)堿、強(qiáng)氧化性物質(zhì)接觸

首先我們先了解下轉(zhuǎn)染,。轉(zhuǎn)染是真核細(xì)胞主動(dòng)或者被動(dòng)導(dǎo)入外源核酸片段而獲得新的表型的過程,，所以轉(zhuǎn)染試劑的作用就是將DNA等運(yùn)輸至細(xì)胞內(nèi)。陽(yáng)離子脂質(zhì)體因自身攜帶正電荷,，可與核酸結(jié)構(gòu)中帶負(fù)電的磷酸基團(tuán)產(chǎn)生靜電作用相結(jié)合,，從而將DNA穩(wěn)定、高效的包裹,。同時(shí),，陽(yáng)離子脂質(zhì)體也能被表面帶負(fù)電的細(xì)胞膜吸附，再通過膜融合或細(xì)胞內(nèi)吞作用將DNA遞送入細(xì)胞內(nèi)發(fā)揮作用,?；谕瑯拥脑恚芏嘌芯恳怖藐?yáng)離子脂質(zhì)體包裹小核酸類藥物,，如反義寡核苷酸,、干擾RNA等。因陽(yáng)離子脂質(zhì)體本身也有細(xì)胞毒性,，會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)造成干擾,，因此在chu方設(shè)計(jì)時(shí)應(yīng)注意DOTAP的用量，配合包封率以及zeta電位等指標(biāo)甚至動(dòng)物實(shí)驗(yàn)進(jìn)行優(yōu)化,。

陽(yáng)離子脂質(zhì)體的分類及應(yīng)用優(yōu)勢(shì)

根據(jù)包載的API不同,，可將陽(yáng)離子脂質(zhì)體分為兩大類，一類是包載以mRNA,、siRNA為代biao的核酸類藥物的脂質(zhì)體,，是基因zhi療中研究zui多,、應(yīng)用zui廣的一種非病毒載體；另一類是包載如紫杉醇,、喜樹堿等小分子抗ai藥的脂質(zhì)體制劑,，具有腫liu新生血管靶向性，對(duì)ai癥也有雙重機(jī)制作用下的好療效,。

陽(yáng)離子脂質(zhì)體作為非病毒載體有著以下這些優(yōu)勢(shì)：

保護(hù)zhi療基因在體內(nèi)循環(huán)中不被降解,。通過對(duì)脂質(zhì)體的表面基團(tuán)進(jìn)行特殊修飾后的陽(yáng)離子脂質(zhì)體能很好地包封片段，促進(jìn)復(fù)合物與細(xì)胞膜的融合,，增加DNA的攝取和表達(dá),；

高xiao穿過細(xì)胞膜和核膜，轉(zhuǎn)染細(xì)胞,，使其表達(dá)/沉默基因,；

如果適應(yīng)癥為ai癥，則能夠選擇性的吸附于帶負(fù)電荷的新生腫liu血管內(nèi)皮細(xì)胞上,，抗ai效果更好,。

陽(yáng)離子脂質(zhì)DOTAP的應(yīng)用

前面也說了，DOTAP是兩親分子,，主要由三部分組成：極性頭部(親水基團(tuán)),、連接鍵、疏水尾部,。通過靜電作用與帶有負(fù)電荷的DNA分子相結(jié)合的是DOTAP的極性頭部,，通常由叔胺或季銨鹽構(gòu)成，后來又研究出咪唑頭部,、氨基酸頭部等,。其極性頭部對(duì)核酸分子的包載效率以及細(xì)胞毒性均有重要的影響。chu方中DOTAP用量越大載藥量越大,，但zeta電位過高細(xì)胞毒性也越大,，制劑安全性受影響，兩者需平衡,。學(xué)術(shù)部的同事曾做過小鼠實(shí)驗(yàn)研究即毒性：當(dāng)zeta電位高于+50mV時(shí)即有可能出現(xiàn)注射立即死亡現(xiàn)象,。對(duì)于包載化療藥物而言，載藥并不依賴DOTAP,，chu方中可添加其它中性磷脂如DSPC,、DPPC等，使用劑量方面受限較小,。

早先DOTAP應(yīng)用于商業(yè)化產(chǎn)品是轉(zhuǎn)染試劑,。DOTAP的極性頭部通過靜電作用與帶有負(fù)電荷的DNA分子穩(wěn)定結(jié)合，兩者混合后可自發(fā)形成穩(wěn)定的復(fù)合物。這種轉(zhuǎn)染方法非常溫和,，可避免脂質(zhì)轉(zhuǎn)染或者其它方式轉(zhuǎn)染帶來的細(xì)胞毒性作用,，并且轉(zhuǎn)染效率高于其它的脂質(zhì)試劑。

目前DOTAP較為成功的應(yīng)用案例有紫杉醇陽(yáng)離子脂質(zhì)體EndoTAG-1以及喜樹堿藥物的陽(yáng)離子脂質(zhì)體EndoTAG-2,，其作為優(yōu)xiu的轉(zhuǎn)染試劑應(yīng)用也很廣,。RNA類藥物的效果與選用的陽(yáng)離子脂質(zhì)材料密切相關(guān)，實(shí)驗(yàn)中遇到問題的時(shí)候不妨多試幾種陽(yáng)離子脂質(zhì)材料,。