任何HPLC或UHPLC柱都是有試用壽命的。正確使用和維護(hù)色譜柱可以延長其使用壽命,，有利于該方法的經(jīng)濟(jì)性,。重要的是遵循*的色譜慣例，如適當(dāng)?shù)臉悠分苽洌悠窇?yīng)通過0.45µm的膜過濾器進(jìn)行高效液相色譜過濾,，通過0.22µm的過濾器進(jìn)行超高效液相色譜過濾）,；流動相的適當(dāng)質(zhì)量/純度（例如，用于等度模式的等度級溶劑,，用于梯度洗脫的梯度級溶劑）,；過濾流動相，發(fā)展良好的方法,，具有足夠強的洗脫能力,，以盡量減少非特定的吸附；與所選色譜柱兼容的溫度、pH值和最大背壓范圍,。另外值得一提的是,，總進(jìn)樣次數(shù)與進(jìn)樣體積成反比，例如,，如果每次進(jìn)樣10µL樣品,，這導(dǎo)致柱壽命為5000次進(jìn)樣，則每次進(jìn)樣100µL的樣品負(fù)載增加通常會將柱壽命縮短至約500次進(jìn)樣,。
即使仔細(xì)遵循了上面列出的所有要點,，用戶有時也會覺得色譜柱的使用壽命應(yīng)該更長。為了找出如何延長色譜柱的壽命,，首先需要了解是什么導(dǎo)致色譜柱老化,。
一、顆粒污染/堵塞色譜柱：
來自流動相或樣品的任何顆粒材料都會污染色譜柱,，一些顆粒也可能會遷移到柱填料中,。這將導(dǎo)致柱背壓增加。這會給泵產(chǎn)生更多的應(yīng)力,，并可能導(dǎo)致柱沉降,，形成空洞，從而導(dǎo)致峰值分裂,。
二,、非特定吸附：
高效液相色譜柱在使用過程中可能會遇到許多不同的物質(zhì)，例如緩沖液中的鹽或流動相和樣品中的雜質(zhì),。這些材料的保留率可能低于或高于分離的分析物,。如果探測器觀察到這些不希望的干擾，則會出現(xiàn)鬼峰,、斑點,、基線干擾甚至負(fù)峰。吸收的雜質(zhì)可能會對保留機(jī)制產(chǎn)生負(fù)面影響（縮短保留時間）或開始作為新的固定相（增加保留時間）,。為這個主題提供的解決方案是什么,？使用液相保護(hù)柱！保護(hù)柱將過濾所有顆粒,，積累非特定吸附材料,，還將延長在微堿性pH下使用的分析主柱的壽命。
三,、壓力增大
每個顆粒填充柱包含一系列粒徑,。粒度分布可能更寬或更窄。在色譜分析過程中,，當(dāng)非加壓注射回路連接到加壓柱時,，柱將承受壓力應(yīng)力,。在這些壓力應(yīng)力期間，塔填料受到?jīng)_擊,，然后顆?？赡芑Q位置，導(dǎo)致通常較大的顆粒上升（朝向塔入口）,，較小的顆粒下降（朝向塔出口）,。在多次注射后，較小的顆粒將積聚在底部,，而較大的顆粒將積聚在頂部,。較小的顆粒區(qū)具有較高的堆積密度背壓，用戶將觀察到背壓穩(wěn)步增加,。這再次為儀器產(chǎn)生了更大的壓力,，并可能導(dǎo)致色譜柱沉降，形成空隙,，從而導(dǎo)致峰分裂,。
許多客戶要求執(zhí)行一些程序，將色譜柱重新生成到初始性能,。因此,，非常仔細(xì)地閱讀每一列隨附的說明書的重要性怎么強調(diào)都不為過。該表還包含有關(guān)建議的色譜柱保養(yǎng)和再生程序的信息,。
然而,，我們可以從理論上分析色譜柱再生的效率。通常,，只有在色譜柱制造商允許的情況下,，才可以通過反沖模式清洗色譜柱約5到20個色譜柱體積，輕松去除入口顆粒對液相色譜柱的污染,。重要的是確保兩個柱狀熔塊（入口和出口）具有相同的孔隙率,。請記住,，被困在色譜柱填料深處的小雜質(zhì)顆粒不太可能被清除,。由于這種清洗，柱背壓應(yīng)該有所降低,。從色譜柱中去除非特定結(jié)合物質(zhì)通常更為困難,，結(jié)果通常不可預(yù)測，因為通常我們不知道這些污染物包含什么化合物,。成功率可能在0％到100％之間,。對于填充小于5µm顆粒的色譜柱，*恢復(fù)色譜柱填充均勻性的可能性很小,。通常,，柱反沖只在短時間內(nèi)有效。
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