柱層析被描述為一種色譜常用的技術(shù),，其中待分離的物質(zhì)被置于裝有吸附劑（固定相）的柱子的最高點(diǎn)上,，以不同的速率通過柱子，這取決于每種物質(zhì)對吸附劑的親和力,。吸附劑和溶劑或溶劑混合物,，并且通常在不同時間從柱中通過時聚集在溶液中。
兩種最常見的柱色譜固定相是硅膠和氧化鋁,，而有機(jī)溶劑被認(rèn)為是最常見的流動相,。
一、柱層析原理
柱層析的主要原理是在固定相的幫助下吸附溶液中的溶質(zhì),，然后將混合物分離成獨(dú)立的成分,。當(dāng)流動相與需要分離的混合物一起從色譜柱頂部進(jìn)入時，混合物中的各組分以不同的速率運(yùn)動,。
與對固定相的較大吸附性和親和力相比,，對固定相具有較低吸附性和親和力的組分會更快地排出。運(yùn)動較快的成分先被取出,，而運(yùn)動慢的成分最后被洗脫出來,。
組件的移動速度如下所示：
R f = 溶質(zhì)通過的距離/溶劑通過的距離
其中R f稱為延遲因子
二、色譜柱組件
使用氣體或液體流動相的典型色譜系統(tǒng)的組件包括：
固定相——通常是一種具有良好吸附性能的固體材料,，應(yīng)適合待分析物的分離,。它不應(yīng)對流動相的流動造成任何阻礙。
流動相和輸送系統(tǒng)——該相由補(bǔ)充固定相的溶劑組成,。
流動相充當(dāng)溶劑,、顯影劑（促進(jìn)樣品中組分的分離以形成條帶）和洗脫劑（去除在實(shí)驗(yàn)期間分離的色譜柱組分）。
三,、色譜柱
液相色譜柱：長2-50cm,，內(nèi)徑4mm，不銹鋼制造,；恒譜生提供各種長度和內(nèi)徑的制備分析柱,，C18色譜柱能夠適用于分離具有不同疏水性的分析物，是用途廣泛的通用型硅膠色譜柱,。
氣相色譜柱：長 1-3m,，內(nèi)徑 2-4mm，由玻璃或不銹鋼制成,。
色譜柱的材料及其尺寸對于支持固定相和促進(jìn)有效分離非常重要,。制備液相色譜柱通常用10、20,、30甚至更大的尺寸,，因?yàn)樗枰艽蟮倪M(jìn)樣量,。恒譜生也同樣提供各種型號的色譜空柱管，比如φ4.6 × 50,、φ4.6 × 150,、φ4.6 × 250等。
四,、其他
進(jìn)樣器系統(tǒng)——負(fù)責(zé)以可重復(fù)的方式將測試樣品輸送到色譜柱頂部,。
檢測器和圖表記錄器——這可以連續(xù)記錄洗脫液中分析物從柱中流出時的存在情況。
檢測依賴于物理參數(shù)的測量（如可見光或紫外線吸收）,。
在圖表記錄器上,，每個分離的分析物都由一個峰表示。
底部的收集器放置在色譜柱的底端,，用于收集分離的分析物,。
五、柱層析程序
柱層析包括的步驟是：
色譜柱的制備,，大多數(shù)情況下,，色譜柱由帶有適當(dāng)固定相的玻璃管組成；
柱底端填充玻璃棉/棉絨或石棉墊,，然后填充固定相,。裝柱后，在頂部放置一個紙盤,，以避免在引入樣品或流動相過程中對固定相的干擾,。固定相（吸附層）的干擾導(dǎo)致不規(guī)則的分離帶。
兩種類型的制備柱,，稱為填料技術(shù),，即：
干裝技術(shù) –將所需量的吸收劑以細(xì)干粉形式添加到色譜柱中，溶劑自由流過色譜柱直至達(dá)到平衡,。
濕法填料——吸附劑漿液與流動相一起制備并倒入柱中,。它被認(rèn)為是包裝的理想技術(shù)。
色譜柱在使用前應(yīng)適當(dāng)清洗并*干燥,。
六,、樣品介紹
樣品（組分的混合物）溶解在最少量的流動相中。在某一時刻,，樣品被引入色譜柱并在色譜柱的頂部被吸收,。通過洗脫過程，可以將單個樣品從該區(qū)域中分離出來,。通過洗脫技術(shù)，各個組分*從色譜柱中分離出來,。
洗脫過程可以通過使用兩種技術(shù)進(jìn)行：
等度洗脫技術(shù)——在整個過程中,，使用相同極性或相同溶劑組成的溶劑,。
梯度洗脫技術(shù)——在整個分離過程中，使用極性逐漸增加或洗脫強(qiáng)度逐漸增加的溶劑,。
七,、成分檢測
如果在柱層析過程中分離的混合物是有色化合物，那么監(jiān)測分離過程很簡單,。如果進(jìn)行分離的化合物是無色的,，則將小部分洗脫液依次收集在標(biāo)記的試管中。通過 TLC,，可以確定每個餾分的組成,。
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