色譜法是一種分離混合物中各組分的分析技術(shù)。色譜柱是色譜中使用的儀器的一部分,。使用柱的五種色譜方法是氣相色譜(GC),,液相色譜(LC),離子交換色譜(IEC),,尺寸排阻色譜(SEC)和手性色譜,。色譜的基本原理可以應(yīng)用于所有五種方法,今天我們分享其中兩種方法——氣相色譜柱和高效液相色譜柱,。
氣相色譜柱
在氣相色譜中,,流動(dòng)相是氣體。氣相色譜柱的長(zhǎng)度通常在1至100米之間,。氣相色譜法(GC):液相固定相結(jié)合或吸附到毛細(xì)管柱的表面上,,或結(jié)合到柱內(nèi)填充的固體載體上。匹配分析物和固定相的極性?xún)烧呔哂邢嗨频臉O性,,固定相的厚度在0.1到8 µm之間,,而厚度越厚,分析物的揮發(fā)性就越大,。
高效液相色譜柱
高效液相色譜(HPLC)是液相色譜的一種,。液相色譜柱共有三種基本類(lèi)型:液-液,液-固和離子交換,。液-液色譜柱不那么受歡迎,,因?yàn)樗鼈兊姆€(wěn)定性有限且不方便。在液-固色譜柱中,,固定相為固體,,分析物吸收到固定相上,從而分析混合物的成分,。通常,,HPLC在分析柱之前有一個(gè)保護(hù)柱,以保護(hù)并延長(zhǎng)分析柱的使用壽命,。保護(hù)柱的作用是去除色譜柱上不可逆的顆粒物,、污染物和分子等。
常見(jiàn)的HPLC色譜柱由不銹鋼制成,也可以由厚玻璃,,聚合物(例如聚醚乙酮),,不銹鋼和玻璃的組合或不銹鋼和聚合物的組合制成。采用不銹鋼材質(zhì)的好處有很多,,比如不銹鋼相較于玻璃這種材質(zhì),,更加的耐腐蝕,耐高壓,,耐磨損,,使用壽命更長(zhǎng),這樣也能很好的降低使用成本,。典型的HPLC分析柱長(zhǎng)3至25 cm,,直徑1至5 mm。與GC色譜柱不同,,這些色譜柱通常是直的,。填充柱的顆粒的典型直徑在3至5 µm之間。當(dāng)色譜柱內(nèi)部堆積的顆粒直徑減小時(shí),,液相色譜柱的效率將會(huì)提高。
峰或峰展寬會(huì)導(dǎo)致色譜柱效率降低,。理想的情況將是尖銳的峰被解決,。物質(zhì)在色譜柱中停留的時(shí)間越長(zhǎng),將導(dǎo)致峰變寬,。加長(zhǎng)色譜柱是改善色譜柱中不同物質(zhì)分離的一種方法,。恒譜生色譜柱高流速,低背壓,,可累加柱效,,高柱效、分離度佳,,平衡時(shí)間短,,縮短分析時(shí)間,節(jié)約溶劑,。恒譜生色譜柱管有多種規(guī)格尺寸,,比如4.6*50、4.6*100,、4.6*150,、4.6*250等,0.1μ,、0.4μ的光潔度可選,。
色譜柱通常需要保持恒溫,以保持效率。塔板高度和理論塔板數(shù)決定了色譜柱的效率,。提高效率將是增加板的數(shù)量并減小板的高度,。
板數(shù)可以通過(guò)以下公式確定:
ñ=大號(hào)/ ?(1)(1)N=L/H
其中L是列的長(zhǎng)度,H是每個(gè)板的高度,。
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