ELISPOT酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)技術(shù)常見問題biosys
ELISpot原理:將細(xì)胞置于包被有特異性抗體的96孔板中培養(yǎng),在有刺激的條件下,,細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子或免疫球蛋白會被包被抗體捕獲,。移除細(xì)胞后,被捕獲的細(xì)胞因子可進(jìn)一步使用生物素標(biāo)記的二抗來標(biāo)識,,其后再與酶標(biāo)記的親和素作用,,并加入底物使其呈色,有反應(yīng)作用的細(xì)胞會留下直徑大小不等的染色斑點(diǎn),。
1.您推薦哪種ELISpot板子,?
我們建議使用PVDF膜的96孔ELISpot板子,有效結(jié)合大量捕獲抗體,,前提是膜用乙醇預(yù)處理(即活化),。
2.您推薦那種檢測儀器?
我們建議使用德國biosys Bioreader 7000E酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)圖像分析儀,。與市場所售儀器相比,,*的減除幻影技術(shù),像素高,,更加標(biāo)準(zhǔn)化,。
3.板的顏色是否重要,我應(yīng)選擇白色板子還是透明板子,?
白色和透明ELISpot板具有相同類型的PVDF膜,。這兩種顏色在讀板儀中略有不同,,但并不重要。(如果有沒有添加液體的漏掉的孔,,透明的板子很容易看見,。)
4.包被前為什么要用乙醇對ELISpot板進(jìn)行預(yù)處理?
ELISpot板子的膜具有多孔疏水結(jié)構(gòu),。為了使大量捕獲抗體能夠結(jié)合,,應(yīng)該用乙醇處理膜以使其親水。這是獲得高質(zhì)量斑點(diǎn)所必需的致密抗體包被層,。
5.如何清洗和清空ELISpot板,?
可以使用多通道移液器手動清洗板子。在不需要無菌條件的洗滌步驟中,,可以使用常規(guī)ELISA板洗滌器,,條件是洗滌頭適合于ELISpot板。將盤子倒置在廢物容器上,,將盤子倒空,。當(dāng)手動清空板子時,確保液體不會從廢物容器中“濺出”,。當(dāng)盤子已經(jīng)清空時,,可以將其倒置在干凈的紙巾上,以從孔中除去殘留的液體。對于底物反應(yīng)后的終洗滌,可以用自來水沖洗BCIP/NBT-Plus,,去離子水或蒸餾水沖洗TMB,。
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