ELISPOT酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)技術(shù)常見問題biosys

ELISpot原理：將細(xì)胞置于包被有特異性抗體的96孔板中培養(yǎng)，在有刺激的條件下,，細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子或免疫球蛋白會被包被抗體捕獲,。移除細(xì)胞后，被捕獲的細(xì)胞因子可進(jìn)一步使用生物素標(biāo)記的二抗來標(biāo)識,，其后再與酶標(biāo)記的親和素作用,，并加入底物使其呈色，有反應(yīng)作用的細(xì)胞會留下直徑大小不等的染色斑點(diǎn),。

1.您推薦哪種ELISpot板子,？

我們建議使用PVDF膜的96孔ELISpot板子，有效結(jié)合大量捕獲抗體,，前提是膜用乙醇預(yù)處理（即活化）,。

2.您推薦那種檢測儀器？

我們建議使用德國biosys Bioreader 7000E酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)圖像分析儀,。與市場所售儀器相比,，*的減除幻影技術(shù)，像素高,，更加標(biāo)準(zhǔn)化,。

3.板的顏色是否重要，我應(yīng)選擇白色板子還是透明板子,？

白色和透明ELISpot板具有相同類型的PVDF膜,。這兩種顏色在讀板儀中略有不同,，但并不重要。（如果有沒有添加液體的漏掉的孔,，透明的板子很容易看見,。）

4.包被前為什么要用乙醇對ELISpot板進(jìn)行預(yù)處理？

ELISpot板子的膜具有多孔疏水結(jié)構(gòu),。為了使大量捕獲抗體能夠結(jié)合,，應(yīng)該用乙醇處理膜以使其親水。這是獲得高質(zhì)量斑點(diǎn)所必需的致密抗體包被層,。

5.如何清洗和清空ELISpot板,？

可以使用多通道移液器手動清洗板子。在不需要無菌條件的洗滌步驟中,，可以使用常規(guī)ELISA板洗滌器,，條件是洗滌頭適合于ELISpot板。將盤子倒置在廢物容器上,，將盤子倒空,。當(dāng)手動清空板子時，確保液體不會從廢物容器中“濺出”,。當(dāng)盤子已經(jīng)清空時,，可以將其倒置在干凈的紙巾上，以從孔中除去殘留的液體。對于底物反應(yīng)后的終洗滌，可以用自來水沖洗BCIP/NBT-Plus,，去離子水或蒸餾水沖洗TMB,。

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