3D細(xì)胞接種的I型生物人工膠原蛋白凝膠

Collagel® Kit

Collagel®Kit具有用于創(chuàng)建3D細(xì)胞接種的生物I型膠原蛋白凝膠的所有組件（請參見表1）,。

Type I Collagen (3 mg/ml in 0.01 M HCl)

5X MEM

Fetal Bovine Serum

1M Hepes

0.1 M NaOH in 5X MEM

一般用途的制備1 MLCOLLAGEL®膠原蛋白凝膠的協(xié)議

1.在1.5 ml離心管中,，合并160μl試劑A，80μl試劑B和20μl試劑C,。
2.在另一個1.5 ml離心管中,，合并700μlCollagel®和40μl試劑D。充分混合后,，確保Collagel®/ Reagent D混合物的pH值為7.0 – 7.2,。 如果不是,，則加入2.5μl試劑D,，混合均勻，然后再次測試,。 重復(fù)直至pH在所需范圍內(nèi),。
3.合并兩個試管，并用移液器充分混合,。
4.此凝膠溶液可用于重懸細(xì)胞沉淀或其他成分以進(jìn)行鋪板,。 參見圖2，了解37°C下的凝膠動力學(xué),。

在FLEXCELL®線性組織TRAIN®培養(yǎng)板中植入生物人工細(xì)胞水合物（BAT）的協(xié)議

1.根據(jù)您選擇的培養(yǎng)基中用于原代培養(yǎng)或連續(xù)細(xì)胞系的既定方案準(zhǔn)備細(xì)胞,。
2.用0.05％的Trypsin，Trypsin-EDTA,，0.05％的細(xì)菌膠原酶或其他方法釋放細(xì)胞,。
3.向細(xì)胞添加含血清的培養(yǎng)基,，以中和Trypsin或膠原酶。
4.計數(shù)細(xì)胞并確定所需的細(xì)胞數(shù)量,，對于6孔TissueTrain®培養(yǎng)板的每個孔,，在150-200 ulCollagel®膠原蛋白凝膠中約50,000-200,000個細(xì)胞。注意：3D凝膠中的細(xì)胞接種密度將根據(jù)細(xì)胞類型而變化,。我們建議測試細(xì)胞接種密度,，以確定適合您的應(yīng)用和細(xì)胞類型的細(xì)胞數(shù)。
5.用培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞兩次,，以去除Trypsin或膠原酶,。
6.將帶有墊片的TissueTrain®板放置在Trough Loader™的頂部，并確保正確放置以實現(xiàn)密封真空,。
7.使用Flexcell®FX-5000™張力系統(tǒng)啟動大伸長率（?90 kPa）靜態(tài)下拉方案,。注意：對于標(biāo)準(zhǔn)Collagel®，建議2小時的膠凝時間,。還建議每6秒以大2％的大伸長率緩慢釋放真空,，直到達(dá)到0％的伸長率。
8.準(zhǔn)備Collagel®培養(yǎng)基基質(zhì),，請參見下表中的示例體積,。在1.5毫升試管（未提供）中混合試劑A，B和C,。在5.0毫升試管（未提供）中,，將試劑D添加到Collagel®中并充分混合（*混合的溶液應(yīng)變成淺桃紅色）。取出10 µl ReagentD-Collagel®混合物,，并涂在pH紙（未提供）上,，以確保pH為中性（7.0-7.2是理想的）。注意：如果不是,，則添加2.5 µL試劑D,，然后再次檢查。重復(fù)直至pH在所需范圍內(nèi),。將試劑A,，B，C的混合物添加到Collagel®混合物中,，然后通過移液將其充分混合,。將所有試劑保持在4°C或在冰上制備。

Thermacol® Kit

Thermacol®試劑盒具有用于創(chuàng)建3D細(xì)胞接種的生物I型膠原蛋白凝膠的所有組件（請參見表1）,，此外還添加了含端肽的膠原蛋白,，這為混合液在低溫（4°C）下提供了更高的穩(wěn)定性，不同 膠凝后的物理特性,，以及快速可控的膠凝動力學(xué),。

一般使用的1毫升THERMOCOL®膠原蛋白凝膠制備協(xié)議

1.在1.5 ml離心管中,，合并160μl試劑A，80μl試劑B和20μl試劑C,。
2.在另一個1.5 ml離心管中,，合并1,630μlCollagel®，70μlThermacol®和40μl試劑D,。充分混合后,，確保Collagel®/ Reagent D混合物的pH值為7.0 – 7.2。 如果不是,，則加入2.5μl試劑D,，混合均勻，然后再次測試,。 重復(fù)直至pH在所需范圍內(nèi),。
3.合并兩個試管，并用移液器充分混合,。
4.此凝膠溶液可用于重懸細(xì)胞沉淀或其他成分以進(jìn)行鋪板,。 關(guān)于在37°C下的凝膠化動力學(xué)，請參見圖2,。

3D細(xì)胞接種的I型生物人工膠原蛋白凝膠