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MTT檢測實(shí)驗(yàn)
一,、實(shí)驗(yàn)介紹:
MTT法又稱MTT比色法,是一種檢測細(xì)胞存活和生長的方法,。其檢測原理為活細(xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍(lán)紫色結(jié)晶甲臜(Formazan)并沉積在細(xì)胞中,,而死細(xì)胞無此功能,。二甲基亞砜(DMSO)能溶解細(xì)胞中的甲臜,用酶聯(lián)免疫檢測儀在568m波長處測定其光吸收值,,可間接反映活細(xì)胞數(shù)量,。
二、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?/span>
1.藥物(也包括其他處理方式如放射線照射)對體外培養(yǎng)的細(xì)胞毒性的測定,;
2.細(xì)胞增殖及細(xì)胞活性測定,。
三、實(shí)驗(yàn)步驟:
四,、實(shí)驗(yàn)結(jié)果展示:
五,、送樣運(yùn)輸要求:
1 凍存細(xì)胞
凍存管寄送前,使用封口膜把凍存管口封嚴(yán)密,,凍存管單獨(dú)用自封袋存放,。干冰運(yùn)輸。運(yùn)輸時間在2天以內(nèi)干冰用量在10kg,,在2-4天,,干冰用量在20kg。
2 活細(xì)胞
使用T25瓶,,瓶蓋無孔,。
生長狀態(tài)良好的細(xì)胞,細(xì)胞密度在30%-40%為宜,,寄送前,,移去瓶內(nèi)舊培養(yǎng)基,添加新培養(yǎng)基至瓶頸部,,保留微量空氣,,擰緊瓶蓋,并用封口膜密封,,瓶身用75%表面消毒,,把瓶用無菌袋或自封袋包裝,然后放置在適當(dāng)?shù)暮袃?nèi),,盒周圍用棉花等做防震防壓處理,。當(dāng)溫度低于10度是要加保溫措施,如暖寶寶等。
細(xì)胞培養(yǎng)條件備注完整,,如培養(yǎng)基,,培養(yǎng)溫度,FBS用量等,。
備注:運(yùn)送時間原則在4天以內(nèi),,如細(xì)胞生長速度快,則加入的培養(yǎng)基血清可以減半,,細(xì)胞密度在20%-30%,。
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