化工儀器網(wǎng)
詳細(xì)介紹
融合mRNA 現(xiàn)貨
融合mRNA 現(xiàn)貨
應(yīng)用領(lǐng)域
- mRNA翻譯和降解研究
- 蛋白質(zhì)生物化學(xué)研究：合成,，折疊,，加工,，穩(wěn)定性,，定位,，降解
- mRNA轉(zhuǎn)移到原代細(xì)胞中而不產(chǎn)生轉(zhuǎn)基因生物（GMO）
- 僅RNA的CRISPR / Cas技術(shù)進(jìn)行基因組工程
技術(shù)特點(diǎn)
- 不依賴脂質(zhì)轉(zhuǎn)染的mRNA轉(zhuǎn)移到活細(xì)胞中
- mRNA轉(zhuǎn)移在5-20分鐘內(nèi)完成
- 沒(méi)有內(nèi)吞作用
- 無(wú)需溶酶體降解
- 沒(méi)有基因轉(zhuǎn)移到細(xì)胞核
- 優(yōu)化用于功能性封端和聚腺苷酸mRNA轉(zhuǎn)移的協(xié)議
- 無(wú)需1級(jí)或2級(jí)生物安全實(shí)驗(yàn)室
- 優(yōu)異的生物相容性,，細(xì)胞毒性低
技術(shù)指標(biāo)
| 形成 | 解 |
| 濃度 | 6毫米 |
| 存儲(chǔ) | –20°C |
| 防爆大 / EM 大 | 750/780 nm（紅外） |
套件組件
| 融合溶液（FS） | 2個(gè)小瓶 |
| 中和緩沖液（NB） | 2個(gè)小瓶 |
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請(qǐng)?jiān)诖颂幷业接嘘P(guān)轉(zhuǎn)染的更多詳細(xì)信息,。
在此處以PDF格式下載整個(gè)“轉(zhuǎn)染”應(yīng)用指南。
選擇指南：何時(shí)使用Fuse-It-mRNA easy或Fuse-It-mRNA,？
| 易熔mRNA | 融合mRNA |
| 一次轉(zhuǎn)染的時(shí)間：20分鐘 | 一次轉(zhuǎn)染的時(shí)間：45分鐘 |
| 特殊配方,，無(wú)需超聲處理 | 需要超聲處理 |
| 高效率* | 高效率* |
*產(chǎn)品使用不同的化學(xué)配方。轉(zhuǎn)染效率取決于細(xì)胞類型和進(jìn)一步優(yōu)化,。
與Fuse-It-mRNA的膜融合與脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染
Fuse-It-mRNA即使在原代細(xì)胞中也能高效合成蛋白質(zhì),。
Fuse-It-mRNA囊泡充滿eGFP-mRNA，并與正常人表皮角質(zhì)形成細(xì)胞（nHEK）融合10分鐘,。eGFP-mRNA轉(zhuǎn)移后兩個(gè)半小時(shí),，50％的細(xì)胞表達(dá)eGFP，八小時(shí)后幾乎100％的細(xì)胞表達(dá)eGFP,。
膜融合-蛋白表達(dá)的直接方法
立即mRNA遞送
包含mRNA的Fuse-It脂質(zhì)體載體僅與細(xì)胞膜融合,，然后將mRNA直接釋放到細(xì)胞質(zhì)中。mRNA翻譯立即開始,，而不會(huì)干擾內(nèi)吞作用,，溶酶體降解或有絲分裂。與傳統(tǒng)的基于脂質(zhì)復(fù)合物的遞送方法不同,，細(xì)胞不會(huì)通過(guò)胞吞作用使mRNA內(nèi)在化,。
融合mRNA
基于脂質(zhì)復(fù)合體的DNA轉(zhuǎn)染
Fuse-It-mRNA導(dǎo)*其快速的mRNA表達(dá)。通過(guò)CHO-K1細(xì)胞與Fuse-It-mRNA的膜融合轉(zhuǎn)移eGFP-mRNA后六小時(shí),，近100％的細(xì)胞表達(dá)eGFP,，而質(zhì)粒轉(zhuǎn)染后表達(dá)eGFP的細(xì)胞數(shù)量低于10％。
高效,，即使在原電池中
基于天然細(xì)胞膜的電荷,，F(xiàn)use-It-mRNA脂質(zhì)體能夠與大多數(shù)細(xì)胞類型有效融合。細(xì)胞系,，非增殖細(xì)胞（例如神經(jīng)元）和廣譜難以轉(zhuǎn)染的原代細(xì)胞可以直接翻譯細(xì)胞質(zhì)中的mRNA,。膜與Fuse-It-mRNA融合可實(shí)現(xiàn)快速高效的蛋白表達(dá)，而沒(méi)有基因組整合的風(fēng)險(xiǎn),。
易于處理
Fuse-It-mRNA方案易于使用，因?yàn)槿诤显噭┖蚼RNA之間的比率在每個(gè)實(shí)驗(yàn)中均保持恒定,。該試劑可以不受限制地使用,，因?yàn)椴粫?huì)產(chǎn)生轉(zhuǎn)基因生物,。
極低的細(xì)胞毒性
與傳統(tǒng)的基于lipoplex的方法相比，F(xiàn)use-It-mRNA僅需要短暫的孵育時(shí)間-5至20分鐘即可獲得大的核苷酸轉(zhuǎn)移速率,。此外,，少量的脂質(zhì)體脂質(zhì)可導(dǎo)致大的mRNA轉(zhuǎn)移，而無(wú)需化合物釋放內(nèi)體,。此功能可保護(hù)敏感細(xì)胞免受載體試劑的潛在毒性影響,。
融合mRNA
基于脂質(zhì)復(fù)合體的mRNA轉(zhuǎn)染
與傳統(tǒng)的基于lipoplex的方法相比，F(xiàn)use-It-mRNA融合不會(huì)傷害細(xì)胞,。在通過(guò)原代人上皮細(xì)胞（nHEK）與Fuse-It-mRNA膜融合將eGFP-mRNA轉(zhuǎn)移后的16小時(shí),，細(xì)胞的活力很高，而用基于經(jīng)典lipoplex的方法處理的細(xì)胞發(fā)生了明顯的細(xì)胞死亡,。
使用Fuse-It-mRNA在CHO-K1細(xì)胞中轉(zhuǎn)移eGFP-mRNA后的蛋白質(zhì)合成：
在開始實(shí)驗(yàn)的2小時(shí)內(nèi),，細(xì)胞中已檢測(cè)到eGFP。eGFP的量增加并保持穩(wěn)定超過(guò)3天（90小時(shí)）,。
注意：使用功能上加帽的和聚腺苷酸化的mRNA將獲得結(jié)果,。
Fuse-It-mRNA處理后各種細(xì)胞類型中mRNA表達(dá)的效率
電池類型 | 生物 | 孵化時(shí)間 | mRNA表達(dá)效率* |
原代細(xì)胞 | |||
| 骨髓來(lái)源的樹突狀細(xì)胞（BMDC） | 鼠類 | 20分鐘 | 70–80％ |
| 胚胎皮質(zhì)神經(jīng)元（貼壁） | 鼠 | 5–15分鐘 | 70–90％ |
| 皮質(zhì)神經(jīng)元，胚胎（懸浮液） | 鼠 | 1.5–2分鐘 | 60–70％ |
| 成纖維細(xì)胞,，包皮 | 人的 | 10–15分鐘 | 60–80％ |
| 肝細(xì)胞 | 人的 | 15–25分鐘 | 60–80％ |
| HUVEC | 人的 | 10–20分鐘 | 50–70％ |
| 巨噬細(xì)胞/單核細(xì)胞 | 人的 | 10–15分鐘 | 30–50％ |
| 胚胎肌細(xì)胞 | 鼠 | 15–25分鐘 | 40–60％ |
| 胚胎成纖維細(xì)胞 | 鼠 | 15–20分鐘 | 30–50％ |
| nHEK,，包皮 | 人的 | 5–15分鐘 | 70–80％ |
| ZNS細(xì)胞，未純化 | 鼠 | 5–15分鐘 | 80–100％ |
干細(xì)胞 | |||
| 互聯(lián)網(wǎng)服務(wù)中心 | 人的 | 10–20分鐘 | 70–90％ |
| MSC | 人的 | 5–15分鐘 | 60–80％ |
細(xì)胞系 | |||
| A549 | 人的 | 20–25分鐘 | 80–100％ |
| CHO-K1 | 倉(cāng)鼠 | 15–20分鐘 | 80–100％ |
| 海拉 | 人的 | 15–20分鐘 | 70–90％ |
| HL-1 | 鼠 | 15–20分鐘 | 5–10％ |
| HoxB8衍生的樹突狀細(xì)胞 | 鼠類 | 5分鐘 | 90–100％ |
| HT-1080 | 人的 | 15–20分鐘 | 80–100％ |
| HUH-7 | 人的 | 10–15分鐘 | 70–90％ |
| 尤爾卡特 | 人的 | 1-2分鐘 | 20–50％ |
| L929 | 鼠 | 15–20分鐘 | 70–90％ |
| MCF-10A | 人的 | 10–15分鐘 | 80–100％ |
| MCF-7 | 人的 | 15–20分鐘 | 70–90％ |
| MDA-MB-231 | 人的 | 10–15分鐘 | 70–90％ |
| MDCK | 狗 | 20–25分鐘 | 20–40％ |
| NIH-3T3 | 鼠 | 15–20分鐘 | 70–90％ |
| N / TERT-1（角質(zhì)形成細(xì)胞,，通過(guò)表達(dá)TERT永生化） | 人的 | 10分鐘 | 80–90％ |
| 大鼠1 | 鼠 | 5-10分鐘 | 80–100％ |
| RAW 264.7 | 鼠 | 15–20分鐘 | 50–70％ |
| THP-1 | 人的 | 1-2分鐘 | 40–70％ |
* mRNA的表達(dá)效率可能會(huì)有所不同,，這取決于進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)因素（例如，培養(yǎng)基,，細(xì)胞適應(yīng)性,，傳代數(shù)和方案優(yōu)化）。
原代細(xì)胞
| 胚皮質(zhì)神經(jīng)元 | |
| 生物： | 鼠 |
| 孵化時(shí)間： | 15分鐘 |
| mRNA | 綠色熒光蛋白 |
| 成纖維細(xì)胞,，包皮 | |
| 生物： | 人的 |
| 孵化時(shí)間： | 15分鐘 |
| mRNA | 綠色熒光蛋白 |
| 肝細(xì)胞 | |
| 生物： | 人的 |
| 孵化時(shí)間： | 25分鐘 |
| mRNA | LifeAct-TagGFP2 |
| 巨噬細(xì)胞/單核細(xì)胞 | |
| 生物： | 人的 |
| 孵化時(shí)間： | 15分鐘 |
| mRNA | 綠色熒光蛋白 |
| HUVEC | |
| 生物： | 人的 |
| 孵化時(shí)間： | 20分鐘 |
| mRNA | 綠色熒光蛋白 |
| HUVEC | |
| 生物： | 人的 |
| 孵化時(shí)間： | 20分鐘 |
| mRNA | LifeAct-TagGFP2 |
| 胚胎肌細(xì)胞 | |
| 生物： | 鼠 |
| 孵化時(shí)間： | 25分鐘 |
| mRNA | 綠色熒光蛋白 |
| 胚胎成纖維細(xì)胞 | |
| 生物： | 鼠 |
| 孵化時(shí)間： | 20分鐘 |
| mRNA | 綠色熒光蛋白 |
| nHEK,，包皮 | |
| 生物： | 人的 |
| 孵化時(shí)間： | 20分鐘 |
| mRNA | 綠色熒光蛋白 |
| nHEK，包皮 | |
| 生物： | 人的 |
| 孵化時(shí)間： | 20分鐘 |
| mRNA | LifeAct-TagGFP2 |
| ZNS細(xì)胞,，未純化 | |
| 生物： | 鼠 |
| 孵化時(shí)間： | 15分鐘 |
| mRNA | 綠色熒光蛋白 |
干細(xì)胞
| 互聯(lián)網(wǎng)服務(wù)中心 | |
| 生物： | 人的 |
| 孵化時(shí)間： | 20分鐘 |
| mRNA | 綠色熒光蛋白 |
| MSC | |
| 生物： | 人的 |
| 孵化時(shí)間： | 5–15分鐘 |
| mRNA | 綠色熒光蛋白 |
細(xì)胞系
| CHO-K1 | |
| 生物： | 倉(cāng)鼠 |
| 孵化時(shí)間： | 20分鐘 |
| mRNA | 綠色熒光蛋白 |
| CHO-K1 | |
| 生物： | 倉(cāng)鼠 |
| 孵化時(shí)間： | 20分鐘 |
| mRNA | mCherry |
| 海拉 | |
| 生物： | 人的 |
| 孵化時(shí)間： | 20分鐘 |
| mRNA | 綠色熒光蛋白 |
| HL-1 | |
| 生物： | 鼠 |
| 孵化時(shí)間： | 20分鐘 |
| mRNA | 綠色熒光蛋白 |
| HT-1080 | |
| 生物： | 人的 |
| 孵化時(shí)間： | 20分鐘 |
| mRNA | 綠色熒光蛋白 |
| HUH-7 | |
| 生物： | 人的 |
| 孵化時(shí)間： | 15分鐘 |
| mRNA | 綠色熒光蛋白 |
| 尤爾卡特 | |
| 生物： | 人的 |
| 孵化時(shí)間： | 1 - 2分鐘 |
| mRNA | 綠色熒光蛋白 |
| L929 | |
| 生物： | 鼠 |
| 孵化時(shí)間： | 15分鐘 |
| mRNA | 綠色熒光蛋白 |
| MCF-10A | |
| 生物： | 人的 |
| 孵化時(shí)間： | 15分鐘 |
| mRNA | 綠色熒光蛋白 |
| MCF-7 | |
| 生物： | 人的 |
| 孵化時(shí)間： | 20分鐘 |
| mRNA | 綠色熒光蛋白 |
| MDA-MB-231 | |
| 生物： | 人的 |
| 孵化時(shí)間： | 15分鐘 |
| mRNA | 綠色熒光蛋白 |
| NIH-3T3 | |
| 生物： | 鼠 |
| 孵化時(shí)間： | 20分鐘 |
| mRNA | 綠色熒光蛋白 |
| N / TERT-1 （角質(zhì)形成細(xì)胞,，通過(guò)表達(dá)TERT永生化） | |
| 生物： | 人的 |
| 孵化時(shí)間： | 10分鐘 |
| mRNA | 綠色熒光蛋白 |
| 大鼠1 | |
| 生物： | 鼠 |
| 孵化時(shí)間： | 10分鐘 |
| mRNA | 綠色熒光蛋白 |
| RAW 264.7 | |
| 生物： | 鼠 |
| 孵化時(shí)間： | 20分鐘 |
| mRNA | 綠色熒光蛋白 |
| THP-1 | |
| 生物： | 人的 |
| 孵化時(shí)間： | 1 - 2分鐘 |
| mRNA | 綠色熒光蛋白 |
注：楊清辰發(fā)布
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