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透射電鏡實驗

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　　一,、概述：

　　透射電鏡(TEM)利用電子束作光源,，用電磁場作透鏡,，經(jīng)加速和聚集的電子束投射到非常薄的樣品上,，形成明暗不同的影像，是綜合物理學和生物學相關(guān)領(lǐng)域重要的分析方法,。透射電子顯微鏡相比光學顯微鏡具有較高分辨率,，可達0.2nm，200-200k倍之間連續(xù)可調(diào),，用于觀察樣品的內(nèi)部超微精細結(jié)構(gòu),。

　　

二、實驗應用

　　TEM在細胞生物學,、病毒學,、病理學、材料科學等諸多領(lǐng)域具有廣泛應用?？梢杂糜谟^測動物植物細胞超微結(jié)構(gòu),，如線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng),、高爾基體,、溶酶體、葉綠體,、液泡及細胞內(nèi)生細菌等結(jié)構(gòu)變化,。觀測病毒顆粒、外泌體,、病原微生物,、各類細菌真菌、納米材料及納米顆粒,、晶體結(jié)構(gòu),。

　　

三、實驗示例

四,、送樣運輸要求：

　　①,、組織樣本：

　　1.組織固定，體積盡可能小,，一般要求1mm3大小,，如果容易漂浮的組織樣本，在管口用棉花塞住保證組織浸泡于2.5%戊二醛中,，組織太大固定不充分,，容易造成照片模糊或者結(jié)構(gòu)溶解。

　　2.組織取材要迅速干脆,，在幾分鐘內(nèi)保存于戊二醛,，保持結(jié)構(gòu)完整性。

　　3.組織在戊二醛中4℃保存1個月以內(nèi)進行實驗,，不要存放太長時間,。

　　4.部分組織需要在電鏡時定位，需要加收定位費,，常規(guī)組織定位如：腎臟觀察腎小球變化,，肺組織觀察特殊的細胞結(jié)構(gòu)，腦組織定位CA1,、CA2,、CA3結(jié)構(gòu)等。

　?、?、細胞樣本：

　　樣本在收集后一定要肉眼可見方可進行實驗,，一般要求細胞量10^6以上。

　　貼壁細胞：

　　棄去培養(yǎng)基,，PBS洗滌3次,，每孔加入1ml 2.5%戊二醛固定1-1.5h，固定完畢后,，細胞刮輕柔的將細胞刮下,，收集至1.5mL離心管內(nèi)，取5ul在顯微鏡下觀察細胞是否刮碎,，如果細胞完整,，則1000rpm離心5min收集細胞，加入1ml新鮮的2.5%戊二醛重懸置于4度避光保存,，一般保存1周進行實驗。

　　懸浮細胞：細胞離心收集后,，加1ml 2.5%戊二醛混勻固定,，4度避光保存。

　?、?、微泡&外泌體：

　　客戶需要將微泡&外泌體分離出來，2.5%戊二醛重懸固定,，2.5%戊二醛的量不要太多100uL-200uL即可,，保證微泡&外泌體的濃度便于觀察尋找。