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應(yīng)用簡介
       凡是來源于胚胎,、組織器官及外周血,，經(jīng)特殊分離方法制備而來的原初培養(yǎng)的細(xì)胞稱之為原代細(xì)胞,。通過原代分離獲得的細(xì)胞具有與體內(nèi)細(xì)胞相似的生物學(xué)特征,，是研究生物體相關(guān)生命活動的理想材料,。
原理介紹
       原代細(xì)胞的分離是將人/小鼠等特異模式動物的細(xì)胞從機體中取出，經(jīng)胰酶,、螯合劑（常用EDTA）處理,，分散成單細(xì)胞，置合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng),，使細(xì)胞得以生存,、生長和繁殖的過程。原代培養(yǎng)是指直接從機體取下細(xì)胞,、組織和器官后立即進(jìn)行培養(yǎng),。因此,，較為嚴(yán)格地說是指成功傳代之前的培養(yǎng)，此時的細(xì)胞保持原有細(xì)胞的基本性質(zhì),，如果是正常細(xì)胞,，仍然保留二倍體數(shù)。但實際上,，通常把第一代至第十代以內(nèi)的培養(yǎng)細(xì)胞統(tǒng)稱為原代細(xì)胞培養(yǎng),。zui常用的原代培養(yǎng)有組織塊培養(yǎng)和分散細(xì)胞培養(yǎng)。
實驗方法
一,、懸浮細(xì)胞的分離方法
       組織材料若來自血液,、羊水、胸水或腹水的懸液材料,，可采用低速離心,。經(jīng)離心后由于各種細(xì)胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據(jù)需要收獲目的細(xì)胞,。
二,、實體組織材料的分離方法
       對于實體組織材料，由于細(xì)胞間結(jié)合緊密,，為了使組織中的細(xì)胞充分分散,，形成細(xì)胞懸液，可采用機械分散法（物理裂解）和消化分離法,。其中,，機械分散法的特點是簡便、快速,，但對組織機械損傷大,，而且細(xì)胞分散效果差，適用于處理纖維成分少的軟組織,。消化分離法是指把組織剪切成較小團(tuán)塊（或糊狀）,，應(yīng)用酶的生化作用和非酶的化學(xué)作用進(jìn)一步使細(xì)胞間的橋連結(jié)構(gòu)松動，使團(tuán)塊膨松,，由塊狀變成絮狀,，此時再采用機械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩,，使細(xì)胞團(tuán)塊得以較充分的分散,，制成少量細(xì)胞群團(tuán)和大量單個細(xì)胞的細(xì)胞懸液，接種培養(yǎng)后,，細(xì)胞容易貼壁生長,。
三、小鼠肝細(xì)胞原代培養(yǎng)
流程圖：

技術(shù)總結(jié)
       1、原代培養(yǎng)材料的選擇,，盡量選取繁殖能力較強的組織,，如胚胎、幼小的生物體或者腫瘤組織等,。
       2,、要注意無菌操作。其操作要求應(yīng)高于外科手術(shù),、
       3,、整個取材操作要迅速，尤其孕鼠浸泡乙醇時間1min左右,，不能過長，以確保胚胎細(xì)胞活性,。
       4,、運用消化法時胰酶溫度應(yīng)低于37℃，濃度只需平時消化細(xì)胞濃度的一半,。因為此過程不像消化培養(yǎng)細(xì)胞時的1~10min,，而是至少20min，先消化下來的細(xì)胞在此胰酶消化液中繼續(xù)消化了10min以上,。所以胰酶不能作用過強,，否則這些細(xì)胞易被損傷而不易生存。
       5,、如使用組織塊法,，則應(yīng)待組織塊略干燥，能黏附于瓶壁時再使之與培養(yǎng)液接觸,，匆使組織塊漂浮起來,。如果組織塊沒有黏壁，則細(xì)胞不易生長,，即使生長也因沒有貼在瓶壁上,，從而因不能觀察到而無法收集到生長的細(xì)胞。
       6,、原代培養(yǎng)操作時,，也可以使用未添加血清的DMEM或PBS洗滌子宮、胚胎或組織塊等,。
       7,、本實驗也可以使用新生乳鼠做培養(yǎng)材料。此時要將乳鼠浸入75%乙醇2~3min使皮膚充分消毒,，由于乳鼠原代培養(yǎng)污染概率更高,，故應(yīng)小心操作，避免污染細(xì)菌,。乳鼠原代培養(yǎng)細(xì)胞的存活率不及胚胎細(xì)胞培養(yǎng)的成功率,。