技術(shù)文章
細(xì)胞自噬科研實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)介紹
閱讀:184 發(fā)布時(shí)間:2024-9-18
應(yīng)用簡(jiǎn)介
自噬與多種生理反應(yīng)相關(guān),,比如腫瘤,,炎癥,免疫應(yīng)答,,氧化應(yīng)激等,。通常情況下,對(duì)于自噬的研究,,除了發(fā)生的機(jī)制本身外,,更多的是將自噬與各種生命活動(dòng)或者疾病結(jié)合起來(lái)。比如研究自噬在腫瘤的發(fā)生發(fā)展,,炎癥反應(yīng),,氧化應(yīng)激等不同生物學(xué)功能的作用。
技術(shù)原理
自噬是細(xì)胞受到刺激后吞噬自身的細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞器,,最終將吞食物在溶酶體內(nèi)降解的過(guò)程,。自噬體(自噬體)為雙層膜包被的圓形或橢圓形結(jié)構(gòu),內(nèi)含細(xì)胞質(zhì),,長(zhǎng)壽蛋白質(zhì)和異常蛋白聚集物,損傷或多余細(xì)胞器如線粒體,,粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和微體,,病毒和細(xì)菌等。
自噬過(guò)程:
1,、細(xì)胞接受自噬誘導(dǎo)信號(hào)后,,在胞漿的某處形成一個(gè)小的類(lèi)似"脂質(zhì)體"樣的膜結(jié)構(gòu),然后不斷擴(kuò)張,,被稱(chēng)為Phagophore,。
2、Phagophore不斷延伸,,將胞漿中的任何成分,,全部攬入,然后"收口",,成為密閉的球狀的autophagosome,,即"自噬體"。
3,、自噬體形成后,,可與細(xì)胞內(nèi)吞的吞噬泡,、吞飲泡和內(nèi)體融合(這種情況不是必然要發(fā)生的)。
4,、自噬體與溶酶體融合形成autolysosome,,期間自噬體的內(nèi)膜被溶酶體酶降解,2者的內(nèi)容物合為一體,,自噬體中的"貨物"也被降解,,產(chǎn)物(氨基酸、脂肪酸等)被輸送到胞漿中,,供細(xì)胞重新利用,,而殘?jiān)虮慌懦黾?xì)胞外或滯留在胞漿中。
實(shí)驗(yàn)方法

一,、自噬誘導(dǎo)劑
1,、BredeldinA/Thapsigargin/Tunicamycin:模擬內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激
2、Carbamazepine/L-690,,330/LithiumChloride(氯化鋰):IMPase抑制劑(即Inositolmonophosphatase,,肌醇單磷酸酶)
3、Earle's平衡鹽溶液:制造饑餓
4,、N-Acetyl-D-sphingosine(C2-ceramide):ClassIPI3KPathway抑制劑
5,、Rapamycin:mTOR抑制劑
6、XestosponginB/C:IP3R阻滯劑
二,、自噬抑制劑
1,、3-Methyladenine(3-MA):(ClassIIIPI3K)hVps34抑制劑
2、BafilomycinA1:質(zhì)子泵抑制劑
3,、Hydroxychloroquine(羥氯喹):Lysosomallumenalkalizer(溶酶體腔堿化劑)
除了選用上述工具藥外,,一般還需結(jié)合遺傳學(xué)技術(shù)對(duì)自噬相關(guān)基因進(jìn)行干預(yù):包括反義RNA干擾技術(shù)(Knockdown)、突變株篩選,、外源基因?qū)氲取?/div>
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