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關鍵詞：Hamster; Primary Hepatocytes; LVG; Metabolism stability; Metabolic studies; Suspension hepatocytes; Plateable hepatocytes

肝臟（liver）是藥物代謝的重要器官,，體外代謝模型多以肝臟為基礎。常用的體外模型有肝微粒體(liver microsomes),、肝S9(liver S9),、肝胞質液(liver cytosol)及原代肝細胞(Primary hepatocytes)等。其中,，原代肝細胞（Primary hepatocytes）因具有較好的體外試驗重現性,，基本維持了肝臟的代謝功能，特別是較好的保留了與體內一致的酶水平,，成為了體外藥物試驗的“金標準",，廣泛應用于藥物代謝與毒理學研究中。

一,、懸浮原代肝細胞的應用

【原代肝細胞的特點】

原代肝細胞(Primary hepatocytes)是指從動物肝臟直接分離的肝實質細胞,。原代肝細胞作為一種體外模型，具有其它體外模型不可替代的優(yōu)點：

①與體內環(huán)境保持一致,，酶量和輔助因子水平都是正常的生理濃度,，可以在接近生理狀態(tài)的的情況下研究藥物的代謝和毒性；

②較好保留和維持了肝細胞的完整形態(tài)和肝細胞體外代謝活性,，真實反應了體內的代謝情況,；

③無須擔心動物實驗的倫理問題，亦可減少動物實驗所需要的的成本開支,，實現了減少（Reduction）,、替代（Replacement）、優(yōu)化（Refinement）的 3R 倫理原則,。

肝細胞被分離后,，可進行貼壁（Plateable）培養(yǎng)和懸浮(Suspension)培養(yǎng)。懸浮培養(yǎng)的原代肝細胞在最開始的4h內細胞色素P450酶的活性最為和體內一致,，隨時間的延長而迅速下降,；貼壁培養(yǎng)的原代肝細胞有足夠的時間從損傷中恢復過來，具有正常細胞的形態(tài)特征,。隨著3D培養(yǎng)技術的出現,，原代肝細胞的應用范圍也進一步得到了擴展。

【原代肝細胞的分離】

常見的原代肝細胞分離有直接剪切法,、組織塊培養(yǎng)法,、胰蛋白酶消化法、兩步膠原酶灌注法（seglen灌注法）和半原位膠原酶灌注法,。其中,，IPHASE采用的兩步膠原酶灌注法是用含有膠原酶的溶液通過門靜脈灌注到肝臟中，使肝實質細胞與間質分開，然后收集分離得到肝實質細胞,，因此對肝臟細胞損傷較小,，進而肝細胞產量和活率均較高，從而成為了分離原代肝細胞的經典方法,。

【懸浮原代肝細胞的應用】

懸浮培養(yǎng)的原代肝細胞在最開始的4h內細胞色素P450酶的活性最為和體內一致,，隨時間的延長而迅速下降，其活性限制的特性使得其與貼壁肝細胞具有不同的應用方向,。

懸浮原代肝細胞在藥物代謝中的應用

原代肝細胞作為藥物代謝研究的經典模型,，在探討藥物在肝中的代謝途徑和藥代動力學的研究中發(fā)揮著重要作用。將苗頭化合物與懸浮原代肝細胞（Suspension primary hepatocytes）共孵育,，不但可對化合物在肝細胞中的代謝穩(wěn)定性進行研究,，而且還可得到相對多量的高純度的代謝產物，在研究藥物生物轉化特征,，尋找藥物可能的代謝物方面優(yōu)勢顯著,。尤其是當有證據顯示化合物的生物轉化途徑為二相代謝、水解作用或肝微粒體中非特異性蛋白結合很高,、肝微粒體中代謝不明顯的時候,，原代肝細胞更為不可替代的體外模型。

懸浮肝細胞在毒性測試中的應用

懸浮肝細胞(Suspension hepatocytes)在毒性測試中具有重要應用價值,，能夠為藥物開發(fā),、化學品安全性評估及毒性機制研究提供可靠的工具,。懸浮肝細胞(Suspension hepatocytes)對毒性物質反應靈敏,，能夠檢測到低濃度的毒性效應，且其可以同時評估多種毒性指標（如細胞活力,、膜完整性,、代謝功能等），即可提供更全面的毒性信息,。因此,，常用懸浮肝細胞①測試藥物對肝細胞的直接毒性，預測其對人體肝臟的潛在危害,；評估藥物代謝產物是否具有肝毒性,；②肝毒性機制研究：研究毒性物質導致肝細胞損傷的分子機制（如氧化應激、線粒體功能障礙,、細胞凋亡等）,；探索毒性物質對肝細胞代謝功能的影響；也可利用懸浮肝細胞進行大規(guī)模藥物或化學物質的毒性篩選,，快速識別潛在物質,。因此，懸浮肝細胞在毒性測試中具有重要意義。

懸浮肝細胞在疾病模型構建中的應用

懸浮肝細胞在疾病模型構建中具有重要應用,，能夠模擬多種肝臟疾病的病理生理過程,，為疾病機制研究和新療法開發(fā)提供有力工具。目前已知的疾病模型有-病毒性肝炎模型,、非酒精性脂肪肝?。∟AFLD）模型、酒精性肝病模型,、肝纖維化和肝硬化模型,、肝癌模型及遺傳性肝病模型等。懸浮原代肝細胞具有高度模擬體內環(huán)境,、高通量篩選能力及個性化醫(yī)療潛力等不可替代的優(yōu)勢,，使其成為肝臟疾病研究領域不-可或-缺的模型系統(tǒng)。因此,，通過懸浮肝細胞疾病模型,，可以加速藥物開發(fā)和疾病治療的進展，進一步推動精準醫(yī)療的實現,！

二,、金黃地鼠懸浮肝細胞的重要性

金黃地鼠（Hamster）是嚙齒目鼠科倉鼠屬哺乳動物，又稱敘利亞地鼠,。其形態(tài)尾粗短,；耳色深呈圓形，眼小而亮,；被毛柔軟,；脊背為鮮明的淡金紅色，腹部與頭側部為白色,；由于突變,，毛色和眼的顏色產生諸多變異，可有野生色,、褐色,、乳酪色、白色,、黃棕色等,，眼亦有紅色和粉紅色；平均壽命2.5-3年,。廣泛分布于歐亞大陸,，目前已遍及世界各國。 晝伏夜行,，夜晚十分活躍,，有嗜眠習慣,。其對室溫變化敏感，以22-25攝氏度為宜,。性情兇猛好斗,，常互相撕打,。食性廣泛,，以植物性食物為主。性成熟早,，雌鼠每隔5天左右發(fā)情1次,。生殖周期為15天左右。每年5-7胎,，每胎產仔約7只,。妊娠期為15-17天，哺乳期為21天,。

金黃地鼠(Hamster)廣泛用于流行病學,、微生物學、免疫學,、遺傳學,、老齡化研究、行為學研究等醫(yī)學研究領域中,；在生物制品方面常用作狂犬疫苗,、乙型腦炎疫苗的檢定用動物；腎臟 細胞還可為多種病毒（如腦炎病毒,、流感感毒,、腺病毒等）、立克次氏體及原蟲的分離,、繁殖,、傳代,、保種等,；對病毒十分敏感，目前已成為病毒研究和實驗的主要動物,，廣泛用于毒性和致畸的研究領域中,。

因此，IPHASE作為體外生物試劑引-領者,，基于金黃地鼠在生物醫(yī)學研究中不-可或-缺的重要性,，研發(fā)生產了國內-首-家金黃地鼠懸浮原代肝細胞，為生物醫(yī)學研究提供更多的試驗動物選擇,，為研究疾病發(fā)展保駕護航,！

IPHASE采用兩步膠原酶灌注法（seglen灌注法）生產金黃地鼠懸浮原代肝細胞,，為驗證肝細胞活性，技術人員以1支批號為23K018的金黃地鼠懸浮原代肝細胞為試驗材料,，經0.4%臺盼藍染色,，確認其活率＞90%，并進一步以終濃度為500µM的7-乙氧基香-豆素作底物,，同1×10^6金黃地鼠懸浮肝細胞于37℃,，5% CO2培養(yǎng)箱中共同孵育30min，得到產物7-羥基香-豆素的生成速率是583.8±9.4 (pmol/million cells/min),，并以此作為細胞色素P450（CytochromeP450）酶的活性反應代表,，這一過程充分說明了IPHASE金黃地鼠懸浮原代肝細胞研發(fā)、生產成功,！

三,、IPHASE相關產品

除金黃地鼠懸浮肝細胞外，IPHASE為滿足不同客戶的不同需求,，研發(fā)生產力多種屬,、多品系的懸浮/貼壁原代肝細胞，力求滿足不同領域客戶的不同需求,，真正做到“一站式"產品服務供應商,！

IPHASE/匯智和源憑借多年的研發(fā)經驗，推出了多領域,、多種類的高-端科研試劑,，為藥物早期研發(fā)提供篩選工具，為生命科學領域的探索提供新材料,、新方法和新手段,，為食品、藥品,、化學品等的遺傳毒性研究提供便捷產品,，望廣大科研工作者咨詢。

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關    于    我    們

匯智和源,，致力于為創(chuàng)新藥研發(fā)企業(yè)及生命科學研究機構提供高品質的生物試劑，IPHASE為公司核心品牌,，品牌宗旨“Innovative Reagents For Innovative Research",。