體外藥代動(dòng)力學(xué)研究
—熱點(diǎn)問(wèn)題—
第一題 酶誘導(dǎo)的受試物濃度一般設(shè)置多少？如果體系待測(cè)物溶解度很差有沒(méi)有什么解決辦法,？
酶誘導(dǎo)試驗(yàn)需要設(shè)置3個(gè)不同的濃度,，濃度水平需涵蓋預(yù)期人體內(nèi)有效血藥濃度，最高濃度的選擇至少比平均的人體內(nèi)的有效血藥濃度高一個(gè)數(shù)量級(jí),。如果在水相中溶解度很差,，可以選擇有機(jī)溶劑作為其溶劑，如DMSO,，但是需要控制有機(jī)溶劑在體系中加入量,。
第二題 在酶誘導(dǎo)試驗(yàn)中是否需要在酶活性和mRNA兩個(gè)水平上進(jìn)行評(píng)估？
通常需要結(jié)合酶活性和mRNA兩個(gè)水平上的結(jié)果做結(jié)論,，且mRNA水平更能真實(shí)反映誘導(dǎo)源頭上的效應(yīng),，且更為敏感。僅測(cè)量酶活性主要存在問(wèn)題是：當(dāng)同時(shí)存在抑制作用時(shí),，可能會(huì)掩蓋誘導(dǎo)作用,，而通過(guò)測(cè)量mRNA水平進(jìn)行轉(zhuǎn)錄分析可解決該問(wèn)題。且應(yīng)通過(guò)陽(yáng)性對(duì)照驗(yàn)證系統(tǒng),，證明其中所有主要的CYP酶有功能且可被誘導(dǎo),。
第三題 酶誘導(dǎo)研究中，研究初期為什么只關(guān)注CYP1A2,，CYP2B6 和 CYP3A4三個(gè)酶,？
CYP誘導(dǎo)的根源是藥物與主要核受體的結(jié)合從而使相應(yīng)的mRNA表達(dá)量增高，從而導(dǎo)致CYP酶表達(dá)水平的升高,。其中,，CYP3A,、CYP2C的核受體是孕烷X受體（PXR），CYP1A2的核受體是多環(huán)芳香烴受體（AhR）,，CYP2B6的核受體是組成型雄烷受體（CAR）,，而CYP2D6則未發(fā)現(xiàn)可被誘導(dǎo)。若體外試驗(yàn)未見(jiàn)對(duì) CYP3A4 酶的誘導(dǎo),，則可不必再評(píng)價(jià)對(duì) CYP2C 酶的誘導(dǎo)作用,；若在研藥物體外研究結(jié)果顯示可以誘導(dǎo) CYP3A4，且結(jié)果提示應(yīng)進(jìn)一步開(kāi)展臨床試驗(yàn),，則需評(píng)估其誘導(dǎo) CYP2C 的可能性,。
第四題 在誘導(dǎo)試驗(yàn)中為什么要連續(xù)加藥誘導(dǎo)？
一般情況下促變藥應(yīng)多次給藥直至其達(dá)到穩(wěn)態(tài)后,，再評(píng)價(jià)其對(duì)底物藥物的影響,。若促變藥并非誘導(dǎo)劑或者時(shí)間依賴型抑制劑，并且可證明單次與多次給藥對(duì)酶/轉(zhuǎn)運(yùn)體的影響相似時(shí),，可采用單次給藥進(jìn)行 DDI 研究,。
第五題 肝細(xì)胞代謝試驗(yàn)中陽(yáng)參藥物的代謝較參考數(shù)據(jù)慢很多，可以考慮哪些原因,？
可能會(huì)有多種原因會(huì)導(dǎo)致該結(jié)果,。首先，需要確認(rèn)試驗(yàn)過(guò)程是否存在問(wèn)題,，不同廠家的產(chǎn)品在使用上會(huì)存在或多或少的差異,，我們需參照產(chǎn)品COA確認(rèn)自己的試驗(yàn)結(jié)果和廠家提供的數(shù)據(jù)是否存在差異。其次,，確認(rèn)肝細(xì)胞的質(zhì)量是否達(dá)標(biāo),，質(zhì)量不好會(huì)直接影響試驗(yàn)結(jié)果。質(zhì)量的確認(rèn)可以從復(fù)蘇存活率,、維持狀態(tài)等多個(gè)方面進(jìn)行考察,。
第六題 請(qǐng)問(wèn)本公司是否可承接原代肝細(xì)胞相關(guān)項(xiàng)目？
本公司有專(zhuān)業(yè)的技術(shù)人員和完善的分析檢測(cè)平臺(tái),，可承接原代肝細(xì)胞相關(guān)項(xiàng)目,，如果感興趣可與我們商務(wù)人員對(duì)接。
第七題 什么情況下需要進(jìn)行UGT表型研究,？
體外或體內(nèi)研究的數(shù)據(jù)顯示UGT酶是候選藥物的主要代謝酶時(shí),，需要考慮進(jìn)行UGT表型研究?；瘜W(xué)抑制法和重組酶法仍然是UGT酶表型研究的常用方法,，但因UGT酶暫未篩選出較為全面的選擇性較強(qiáng)的抑制劑，重組酶法常為其常用方法,，也是有效的方法,。
第八題 酶抑制研究中什么時(shí)候測(cè)定Ki值,？
當(dāng)IC50＜1 μM時(shí)，強(qiáng)烈推薦進(jìn)行Ki值測(cè)定,；當(dāng)IC50為1~10 μM之間,，較為接近有效濃度時(shí)，也可以考慮測(cè)定Ki值,。
第九題 是否需要評(píng)估化合物是否為時(shí)間依賴性抑制劑,？
TDI是一種比可逆抑制帶來(lái)更嚴(yán)重的副作用的狀況，初步推薦單點(diǎn)法或2點(diǎn)法評(píng)估,，高點(diǎn)可以為50×Cmax或劑量/250mL的0.1倍,，一旦發(fā)現(xiàn)，則必須精確評(píng)估,。
第十題 酶抑制試驗(yàn)中,，底物的消耗量為什么要小于20%？
通常情況下,，酶抑制試驗(yàn)我們會(huì)檢測(cè)產(chǎn)物的生成量,，會(huì)盡量選擇相對(duì)高的底物濃度，且保證選擇的孵育時(shí)間點(diǎn)是在線性反應(yīng)時(shí)間點(diǎn)內(nèi),。如果底物濃度過(guò)低，有可能會(huì)很快達(dá)到平衡,，從而導(dǎo)致結(jié)果判定有誤或難以判斷,。
十一題 酶抑制研究中，是否可以用Cocktail探針底物法,？
文獻(xiàn)和資料中提到,，IND申報(bào)需要使用單底物法進(jìn)行酶抑制研究的，篩選型研究可以使用cocktail探針?lè)ā?/span>
十二題 篩選階段酶抑制試驗(yàn)可以不設(shè)置平行嗎,？
建議試驗(yàn)中設(shè)置平行,，如果平行做不好，可能試驗(yàn)系統(tǒng)問(wèn)題存在,。設(shè)置平行可確保組內(nèi)精密度,、準(zhǔn)確度得到有效控制，也是試驗(yàn)結(jié)果有效性的直接證據(jù),。
十三題 體外代謝試驗(yàn)需要設(shè)計(jì)很多對(duì)照組,，請(qǐng)問(wèn)對(duì)照組是必須的嗎？是否可以刪減,？
對(duì)照組的目的是考察化合物本身在不同組分中的穩(wěn)定性,，對(duì)照組結(jié)果穩(wěn)定是整個(gè)代謝試驗(yàn)成立的前提條件。
十四題 化合物在有機(jī)溶劑中可以檢測(cè)到,，但加入孵育體系后檢測(cè)不到,？
初步判定可能是化合物在水相中溶解度不好或者化合物在水相環(huán)境中易水解導(dǎo)致的,。若是由于在水相中溶解度不好導(dǎo)致，可優(yōu)化樣品前處理過(guò)程,；若相同濃度化合物在水溶液和有機(jī)溶劑的響應(yīng)相差50%以上,，判定化合物易水解（0.1M PBS對(duì)某些化合物而言，可能存在基質(zhì)效應(yīng),，判定前需排除基質(zhì)效應(yīng)影響）,，不易進(jìn)行體外代謝試驗(yàn)，建議確認(rèn)化合物發(fā)生藥效是化合物本身還是其水解產(chǎn)物,。
十五題 有機(jī)溶劑的加入對(duì)試驗(yàn)結(jié)果有什么影響,？
孵育體系中有機(jī)溶劑的含量要控制在1%以內(nèi)。孵育體系中發(fā)揮代謝作用的組分是酶,，而酶的本質(zhì)是蛋白,，有機(jī)溶劑加入過(guò)多，會(huì)導(dǎo)致酶變性,，活性降低或喪失,，故孵育體系中要控制有機(jī)溶劑的加入量。
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