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單個(gè)核細(xì)胞的體積、形態(tài)和比重與其它細(xì)胞不同,，在沉降過程中不同比重的細(xì)胞會(huì)處于不同的分布位置,。因此，可利用各種血細(xì)胞和單個(gè)核細(xì)胞比重之間的差異將各種血細(xì)胞與單個(gè)核細(xì)胞分離開來,。

1）無菌條件下取出脾臟,，在培養(yǎng)皿中加入適量的分離液，將脾臟放入細(xì)胞篩中,，置于分離液中進(jìn)行研磨（具體方法見示意圖1）,。

2）將懸有脾臟細(xì)胞的分離液立即轉(zhuǎn)移入無菌離心管中，在上層覆蓋適量的RPMI 1640培養(yǎng)基,，且需保持液面分界清晰,。

3） 800g,，室溫,，離心 20min-30min（注：設(shè)置較慢的加速度和減速度，如果有十檔,，設(shè)為第三檔）,。

4） 離心結(jié)束后，吸棄RPMI 1640培養(yǎng)基,，小心吸取脾臟單個(gè)核細(xì)胞層（即白膜層）并轉(zhuǎn)移至15mL離心管中,。離心結(jié)束后，管內(nèi)液面從上至下依次為RPMI 1640培養(yǎng)基層,、脾臟單個(gè)核細(xì)胞層,、分離液層和紅細(xì)胞層（見圖2）。

5）向離心管中加入10mL 的RPMI 1640培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞,，250g,，室溫離心 10min ，棄上清,。重復(fù)該步驟 1~2 次,，即可用于后續(xù)試驗(yàn)。

1）不同種屬動(dòng)物單個(gè)核細(xì)胞的比重有一定差異,，請(qǐng)選擇合適的分離液進(jìn)行脾臟單個(gè)核細(xì)胞的分離,。

2）分離液易揮發(fā)，在脾臟研磨過程中請(qǐng)盡量縮短時(shí)間,，將研磨時(shí)間控制在5min以內(nèi),。

3）研磨過程中請(qǐng)盡量控制研磨力度,，保證細(xì)胞篩懸空，避免在培養(yǎng)皿底部直接研磨而造成細(xì)胞大量死亡,。

4）若研磨后細(xì)胞懸液呈暗紅色,，需將其進(jìn)行適量稀釋后再進(jìn)行后續(xù)操作。

5）為保證細(xì)胞的活力,，整個(gè)操作過程請(qǐng)輕柔,，避免對(duì)細(xì)胞造成機(jī)械性的損傷。

6）為保持細(xì)胞狀態(tài)良好,，請(qǐng)盡量縮短整個(gè)試驗(yàn)的周期,。

IPHASE/匯智和源針對(duì)不同種屬動(dòng)物脾臟單個(gè)核細(xì)胞分離的特點(diǎn)，開發(fā)了對(duì)應(yīng)的單個(gè)核細(xì)胞分離試劑盒,，包括人,，猴，犬,，大鼠,，小鼠，兔,，豬等,。該試劑盒包含單個(gè)核細(xì)胞分離液和洗滌液兩個(gè)組分，各成分對(duì)細(xì)胞無毒性,，不會(huì)影響細(xì)胞的原始狀態(tài),；同時(shí)，該試劑盒操作簡(jiǎn)單便捷,，可大大縮短細(xì)胞分離時(shí)間,，分離所得細(xì)胞純度高、狀態(tài)好,、得率高,。