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骨髓單個核細(xì)胞（Bone Marrow Mononuclear Cells，BMMNCs）是一群混合細(xì)胞,，其中絕大多數(shù)是早幼粒細(xì)胞,、早幼紅細(xì)胞,、成熟B細(xì)胞、T細(xì)胞和單核細(xì)胞等,，還含有少量的干細(xì)胞,，包括間充質(zhì)干細(xì)胞、造血干細(xì)胞和內(nèi)皮祖細(xì)胞等,，它們密度相近,，因此可通過密度梯度離心法從骨髓液中分離出來。

單個核細(xì)胞的體積,、形態(tài)和比重與其它細(xì)胞不同,，在沉降過程中不同比重的細(xì)胞會處于不同的分布位置。因此,，可利用各種血細(xì)胞和單個核細(xì)胞比重之間的差異將各種血細(xì)胞與單個核細(xì)胞分離開來,。

1）  無菌條件下抽取骨髓于含抗凝劑的采血管內(nèi)，將骨髓與生理鹽水或PBS溶液按等比例混勻,，備用,。

2）  按照稀釋骨髓：細(xì)胞分離液比例為3:2的比例，緩慢將稀釋骨髓液加入到細(xì)胞分離液上層,，需保持液面分界清晰,。

3）  800g，室溫,，離心 20min-30min（注：設(shè)置較慢的加速度和減速度,，如果有十檔，設(shè)為第三檔）,。

4）  小心吸取骨髓單個核細(xì)胞層（即白膜層）并轉(zhuǎn)移至15mL離心管中,。離心結(jié)束后，管內(nèi)液面從上至下依次為無細(xì)胞骨髓液層,、骨髓單個核細(xì)胞層,、分離液層和紅細(xì)胞層（見圖1）。

5）  向離心管中加入10mL 的生理鹽水或PBS重懸細(xì)胞,，250g,，室溫離心 10min ，棄上清,。重復(fù)該步驟 1~2 次,，即可用于后續(xù)試驗(yàn)。

1）  不同種屬動物單個核細(xì)胞的比重有一定差異,，請選擇合適的分離液進(jìn)行骨髓單個核細(xì)胞的分離,。

2）  骨髓液新鮮程度是影響分離效果的關(guān)鍵因素，請盡量使用采集后24小時內(nèi)的骨髓液進(jìn)行單個核細(xì)胞分離,。

3）  為保證細(xì)胞的活力,，整個操作過程請輕柔,，避免對細(xì)胞造成機(jī)械性的損傷。

4）  為保持細(xì)胞狀態(tài)良好,，請盡量縮短整個試驗(yàn)的周期,。

IPHASE/匯智和源針對不同種屬動物骨髓單個核細(xì)胞分離的特點(diǎn)，開發(fā)了對應(yīng)的單個核細(xì)胞分離試劑盒,，包括人,，猴，犬,，大鼠,，小鼠，兔,，豬等,。該試劑盒包含單個核細(xì)胞分離液和洗滌液兩個組分，各成分對細(xì)胞無毒性,，不會影響細(xì)胞的原始狀態(tài),；同時，該試劑盒操作簡單便捷,，可大大縮短細(xì)胞分離時間,，分離所得細(xì)胞純度高、狀態(tài)好,、得率高,。