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　　單克隆抗體是由高度一致的免疫細(xì)胞制成的抗體，這些免疫細(xì)胞是單一親本細(xì)胞的所有克隆,。單克隆抗體具有單價(jià)親和力,，因?yàn)樗鼈兘Y(jié)合相同的表位(抗體識(shí)別抗原的部位)。相反,，多克隆抗體結(jié)合多個(gè)表位,，通常由幾個(gè)不同的漿細(xì)胞(分泌抗體的免疫細(xì)胞)譜系組成。也可以通過(guò)將一種單克隆抗體的治療靶點(diǎn)增加到兩個(gè)表位來(lái)設(shè)計(jì)雙特異性單克隆抗體,。

　　單克隆抗體制備過(guò)程

　　1. 免疫動(dòng)物

　　免疫動(dòng)物是用目的抗原免疫小鼠,，使小鼠產(chǎn)生致敏B淋巴細(xì)胞的 過(guò)程。 一般選用6-8周齡雌性BALB/c小鼠,，按照預(yù)先制定的免疫方案進(jìn)行免疫注射,。 抗原通過(guò)血液循環(huán)或淋巴循環(huán)進(jìn)入外周免疫器官，刺激相應(yīng)B淋巴細(xì)胞克隆,，使其活化,、增殖，并分化成為致敏B淋巴細(xì)胞,。

　　2.細(xì)胞融合

　　采用二氧化碳?xì)怏w處死小鼠,，無(wú)菌操作取出脾臟，在平皿內(nèi)擠壓研磨,，制備脾細(xì)胞懸液,。 將準(zhǔn)備好的同系骨髓瘤細(xì)胞與小鼠脾細(xì)胞按一定比例混合，并加入促融合劑聚乙二醇,。在聚乙二醇作用下,，各種淋巴細(xì)胞可與骨髓瘤細(xì)胞發(fā)生融合，形成雜交瘤細(xì)胞,。

　　3.選擇性培養(yǎng)

　　選擇性培養(yǎng)的目的是篩選融合的雜交瘤細(xì)胞,，一般采用HAT選擇性培養(yǎng)基。在HAT培養(yǎng)基中,，未融合的骨髓瘤細(xì)胞因缺乏次黃嘌呤-鳥(niǎo)嘌呤-磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶,，不能利用補(bǔ)救途徑合成DNA而死亡。 未融合的淋巴細(xì)胞雖具有次黃嘌呤-鳥(niǎo)嘌呤-磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶,，但其本身不能在體外長(zhǎng)期存活也逐漸死亡,。 只有融合的雜交瘤細(xì)胞由于從脾細(xì)胞獲得了次黃嘌呤-鳥(niǎo)嘌呤-磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶,，并具有骨髓瘤細(xì)胞能無(wú)限增殖的特性，因此能在HAT培養(yǎng)基中存活和增殖,。

　　4.雜交瘤陽(yáng)性克隆的篩選與克隆化

　　在HAT培養(yǎng)基中生長(zhǎng)的雜交瘤細(xì)胞,，只有少數(shù)是分泌預(yù)定特異性單克隆抗體的細(xì)胞，因此,，必須進(jìn)行篩選和克隆化,。通常采用有限稀釋法進(jìn)行雜交瘤細(xì)胞的克隆化培養(yǎng)。采用靈敏,、快速,、特異的免疫學(xué)方法，篩選出能產(chǎn)生所需單克隆抗體的陽(yáng)性雜交瘤細(xì)胞,，并進(jìn)行克隆擴(kuò)增,。經(jīng)過(guò)全面鑒定其所分泌單克隆抗體的免疫球蛋白類型、亞類,、特異性,、親和力、識(shí)別抗原的表位及其分子量后,，及時(shí)進(jìn)行凍存,。

　　5.單克隆抗體的大量制備

　　單克隆抗體的大量制備主要采用動(dòng)物體內(nèi)誘生法和體外培養(yǎng)法。

　　(1)體內(nèi)誘生法 取BALB/c小鼠,，首先腹腔注射0.5ml液體石蠟或降植烷進(jìn)行預(yù)處理,。1-2周后，腹腔內(nèi)接種雜交瘤細(xì)胞,。雜交瘤細(xì)胞在小鼠腹腔內(nèi)增殖,，并產(chǎn)生和分泌單克隆抗體。約1-2周,，可見(jiàn)小鼠腹部膨大。用注射器抽取腹水,，即可獲得大量單克隆抗體,。

　　(2)體外培養(yǎng)法 將雜交瘤細(xì)胞置于培養(yǎng)瓶中進(jìn)行培養(yǎng)。在培養(yǎng)過(guò)程中,，雜交瘤細(xì)胞產(chǎn)生并分泌單克隆抗體,，收集培養(yǎng)上清液，離心去除細(xì)胞及其碎片,，即可獲得所需要的單克隆抗體,。但這種方法產(chǎn)生的抗體量有限。各種新型培養(yǎng)技術(shù)和裝置不斷出現(xiàn),，大大提高了抗體的生產(chǎn)量,。