色譜柱由柱管,、壓帽,、卡套（密封環(huán)）、篩板（濾片）,、接頭,、螺絲等組成。柱管多用不銹鋼制成,，壓力不高于70 kg/cm2 時,，也可采用厚壁玻璃或石英管，管內(nèi)壁要求有很高的光潔度,。為提高柱效,，減小管壁效應，不銹鋼柱內(nèi)壁多經(jīng)過拋光,。也有人在不銹鋼柱內(nèi)壁涂敷氟塑料以提高內(nèi)壁的光潔度,，其效果與拋光相同。還有使用熔融硅或玻璃襯里的,，用于細管柱,。色譜柱兩端的柱接頭內(nèi)裝有篩板，是燒結(jié)不銹鋼或鈦合金,，孔徑0.2~20μm（5~10&μm）,，取決于填料粒度，目的是防止填料漏出,。

　　一,、賽默飛色譜柱選擇的簡單思路

　　1.確定分離目的確定你的應用是否要求高分離度、短分析時間,、高靈敏度,、長柱壽命，低的實驗成本等,。

　　2.評估分析物的化學性質(zhì)評估分析物的化學性質(zhì)..諸如化學結(jié)構(gòu),、溶解性,、穩(wěn)定性等。

　　3.選擇合適的色譜柱了解色譜填料的物理和化學性質(zhì),。

　　二,、賽默飛色譜柱選擇的條件

　　填料基質(zhì)

　　1.硅膠基質(zhì)：純度高本錢低，強度大,，化學修飾輕易,，但pH值范圍有限,。大多硅膠基質(zhì)填料在pH2-8之間穩(wěn)定,，但經(jīng)過特殊修飾的硅膠鍵合相可以穩(wěn)定在pH1.5-10。

　　2.聚合物基質(zhì)：應用pH值范圍寬,，溫度穩(wěn)定(高溫可以達到80度以上),，機械強度小。

　　顆粒外形

　　大多現(xiàn)代HPLC填料都是球形顆粒,，但有時是不規(guī)則的顆粒,。球形顆粒提供較低的柱壓、較高的柱效和穩(wěn)定性以及較長的柱壽命在使用高粘度的活動相時;不規(guī)則顆粒有較大比表面積和相對低廉的價格,。

　　顆粒粒徑

　　粒徑越小柱效越高,、分離度越高，但同時會導致較高柱壓降,。選擇1.5-3μm的填料以解決一些復雜樣品,UPLC可以使用1.5μm的填料;另外10μm或更大粒徑的填料用作半制備或制備柱,。

　　含碳量

　　含碳量指的是硅膠表面鍵合相的比例，與比表面積和鍵合覆蓋度等有關(guān),。高含碳量進步柱容量,、分辨率及分析時間，用于要求高分離度的復雜樣品;低含碳量分析時間短,、展現(xiàn)不同的選擇性,，用于快速分析簡單樣品及需要高含水活動相條件的樣品。一般C18的含碳量在7-19%不等,。

　　孔徑和比表面積

　　HPLC吸附介質(zhì)是多孔的顆粒,，盡大多數(shù)的反應表面于孔內(nèi)。因此,，分子必須進進孔內(nèi)才能被吸附和分離,。

　　孔徑和比表面積是相輔相成的兩個概念?？讖叫”缺砻娣e大,，反之亦然。比表面積大,，增加樣品與鍵合相之間的反應,，增加保存,上樣量和復雜成分的分離度;比表面積小,，平衡時間快，適合梯度分析,。

　　孔容和機械強度

　　孔容,，又稱“孔體積”。指單位顆粒的空隙體積大小,。它能很好的反應填料的機械強度,。孔體積大的填料相對孔體積小的填料機械強度要略弱,?？左w積為1.5mL/g或更小的填料大多用于HPLC分離，而孔體積大于1.5mL/g的填料使用于尺寸排阻色譜和低壓色譜,。

　　封端封端

　　封端能夠降低極性堿性化合物由于與裸露的硅醇基相互作用而產(chǎn)生的拖尾峰,。不封端鍵合相相對封端鍵合相會產(chǎn)生不同的選擇性，尤其是極性樣品,。