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細(xì)菌內(nèi)毒素檢測（BET,，Bacterial Endotoxins Testing）的創(chuàng)新技術(shù)問世后，證明平臺(tái)間檢測的等效性就變得至關(guān)重要,?！?strong style="margin: 0px; padding: 0px; outline: 0px; max-width: 100%; box-sizing: border-box !important; overflow-wrap: break-word !important; visibility: visible;">Sievers^® Eclipse比例確認(rèn)測試"旨在確認(rèn)使用96孔板時(shí)的樣品與鱟試劑的1:1比例始終對(duì)使用Eclipse微孔板也同樣有效。只要保持1:1比例,，就能使樣品和鱟試劑（LAL,，LimulusAmoebocyte Lysate，鱟變形細(xì)胞溶解物）之間的生物化學(xué)反應(yīng)保持不變,。即使在使用Sievers Eclipse平臺(tái)時(shí)減少光學(xué)孔的總?cè)莘e,，每個(gè)孔中的1:1比例也能保持不變，用戶可以確信樣品和標(biāo)準(zhǔn)品的內(nèi)毒素測量值是準(zhǔn)確有效的,。

使用96孔板的動(dòng)態(tài)顯色法細(xì)菌內(nèi)毒素檢測技術(shù),，要求在每個(gè)孔中加注標(biāo)準(zhǔn)品或樣品與鱟試劑的混合液，然后觀察液體的顏色變化,。檢測成功的關(guān)鍵在于精確控制樣品和鱟試劑的用量,。USP <85>規(guī)定,，對(duì)于某些檢測參數(shù)（例如體積比,、反應(yīng)起效時(shí)間、pH值等）,，應(yīng)遵循鱟試劑生產(chǎn)商提供的使用說明（IFU,，Instructions for Use）。

有的使用說明指示用戶準(zhǔn)備1:1樣品與鱟試劑混合液時(shí),，建議使用100 µL（而非典型的200 µL）作為孔的總?cè)莘e,，并指出100 µL有助于達(dá)到最佳的檢測靈敏度。該使用說明表明,，1:1的比例關(guān)系（而非孔的總?cè)莘e）才是檢測成功的關(guān)鍵,。只要每個(gè)孔中的樣品和鱟試劑的比例是1:1，反應(yīng)就能準(zhǔn)確進(jìn)行,，產(chǎn)生的結(jié)果就是等效的,。

如果比例不是1:1，那么樣品與鱟試劑的用量就不對(duì),，就會(huì)對(duì)反應(yīng)動(dòng)力學(xué)過程和整體檢測結(jié)果產(chǎn)生顯著影響,。除了孔的總?cè)莘e之外,，還需考慮反應(yīng)速度。如果反應(yīng)較快,，那么起始反應(yīng)時(shí)間就較短,，內(nèi)毒素濃度就較高。如果反應(yīng)較慢,，則情況相反——起始反應(yīng)時(shí)間較長,，內(nèi)毒素濃度較低。

錯(cuò)誤的比例還會(huì)影響鱟試劑在與樣品混合時(shí)的自然緩沖能力,。如果達(dá)不到1:1的精確比例,，則反應(yīng)混合液的pH值就不在建議的6-8范圍之內(nèi)，就會(huì)影響檢測的整體反應(yīng)動(dòng)力學(xué)過程,。

1:1比例確認(rèn)測試旨在證明在Sievers Eclipse微孔板的104個(gè)孔中都達(dá)到了鱟試劑和樣品的1:1精確比例,。進(jìn)行測試時(shí)，用戶需要一個(gè)新的Sievers Eclipse微孔板和Sievers Eclipse 1:1比例確認(rèn)套件,，該套件包括一個(gè)水瓶和一個(gè)染色劑瓶,。開始分析之前，Eclipse軟件會(huì)指導(dǎo)用戶在對(duì)應(yīng)的位置和鱟試劑LAL端口,，完成水和染色劑的準(zhǔn)備和注射,。然后，Eclipse微孔板按照正常分析時(shí)的步驟運(yùn)行,。1:1比例確認(rèn)測試不依賴于動(dòng)力學(xué)酶促反應(yīng),，因此測試所需的總時(shí)間較短。

分析完畢后,，Eclipse軟件的“1:1比例結(jié)果（1:1 Ratio Results）"選項(xiàng)卡中會(huì)顯示報(bào)告,。報(bào)告內(nèi)容除了包括在運(yùn)行測試之前輸入的常規(guī)信息（例如分析儀序列號(hào)、Eclipse微孔板信息,、1:1比例確認(rèn)樣品信息）,，還包括104個(gè)光學(xué)孔的各自的平均光密度。

Sievers Eclipse微孔板是精密設(shè)計(jì)的微流控液體處理設(shè)備。此款微孔板利用計(jì)量分配腔,，以恒定的通道幾何形狀和運(yùn)動(dòng)方式,，將精確等量的樣品和鱟試劑同時(shí)送到光學(xué)孔中。正是Eclipse微孔板的精密的液體控制能力,，確保了每次檢測的所有104個(gè)光學(xué)孔中都達(dá)到樣品與鱟試劑的1:1關(guān)鍵性比例,。

鱟試劑生產(chǎn)商提供的使用說明可能會(huì)直接表明1:1比例，也可能會(huì)指導(dǎo)用戶混合一定量的樣品和鱟試劑,，但液體總體積未必一定是200 µL,。如果光路徑較長，或者為了進(jìn)行精確移液,，生產(chǎn)商會(huì)建議設(shè)置較大容積,，以提高檢測精度。對(duì)于標(biāo)準(zhǔn)的96孔微孔板來說,，建議設(shè)置的孔的總?cè)莘e在75-200 µL范圍內(nèi),?！盀榱诉M(jìn)行有效測量,，建議設(shè)置的微孔板的最小孔容積通常大于最大孔容積的1/3。"¹ 所以,，每次檢測的每個(gè)孔中的樣品與鱟試劑的比例達(dá)到1:1,，非常重要，而沒有必要使用整個(gè)孔的容積,。

在Sievers Eclipse平臺(tái)上進(jìn)行1:1比例確認(rèn)測試的結(jié)果證明,，即使孔的總?cè)莘e顯著減小，每次檢測的每個(gè)光學(xué)孔中都能達(dá)到至關(guān)重要的1:1比例,。始終保持1:1的精確比例,，用戶就能確認(rèn)在轉(zhuǎn)換平臺(tái)時(shí)，生物化學(xué)過程是等效的,。建議每年由Sievers分析儀認(rèn)證的現(xiàn)場服務(wù)工程師或代表來完成此項(xiàng)確認(rèn)測試任務(wù),。

1. Pusterla, Tobias, PhD. “Which is the best microplate for my assay?" BMG Labtech, 2018 May 30.