本文討論有關內(nèi)毒素檢測的樣品“批量檢測（Batch Testing）"和樣品“保存時間（Hold Times）"，以及如何通過簡單研究來較大化提高檢測效率,。質量控制實驗室和研發(fā)實驗室并不都是高通量實驗室,。很多實驗室每天或每周只收到少量需要進行鱟試劑的樣品。為了使鱟試劑檢測更省錢,、更高效,，實驗室會先將樣品保存起來，攢夠一定數(shù)量的樣品時,，才會用96孔板或Sievers® Eclipse微孔板進行“批量檢測",。批量檢測能為用戶節(jié)省昂貴的鱟試劑。
進行批量檢測可以提高檢測效率,、降低總檢測成本,。然而，不少實驗室的內(nèi)部“標準操作規(guī)程（SOP,，Standard Operating Procedure）"列明了檢測的時間要求,，例如必須在收到樣品或采集樣品后的24小時內(nèi)進行檢測。這種時間限制使小型實驗室無法保存批量樣品,，而實際需要進行的檢測也并非如此急迫,。監(jiān)管部門并不強制要求用戶在一定時間內(nèi)進行檢測，而“良好生產(chǎn)規(guī)范（GMP,，Good Manufacturing Practice）"普遍要求用戶在樣品不損失內(nèi)毒素的前提下確定正確的檢測時間要求,，也就是“樣品保存時間"。研究并確定正確的樣品保存時間,，能夠為平衡檢測的質量,、成本、效率提供關鍵依據(jù),，也有助于用戶了解何時應將樣品送達實驗室進行分析,，何時可以獲得檢測結果,。
為了節(jié)約昂貴的鱟試劑、消耗品成本,，提高微孔板的使用率,，用戶應進行簡單的樣品保存時間研究，以確定在批量檢測的樣品保存時間超過24小時的情況下樣品不會損失內(nèi)毒素,。樣品保存時間研究旨在幫助質量控制實驗室制定正確的“標準操作規(guī)程",，明確規(guī)定樣品在檢測之前可以存放的時間1。樣品保存時間研究的重要內(nèi)容之一是存放樣品的容器,。用于內(nèi)毒素檢測的樣品應采集并存放在不干擾鱟試劑檢測和不吸收內(nèi)毒素的容器中,。聚丙烯容器會吸收內(nèi)毒素，而聚苯乙烯或硼硅酸鹽玻璃容器是最佳的樣品容器,。
至少對4個時間點進行樣品保存時間研究,，才能確保研究結果有效且準確2。比如,，研究的時間點可以選在第0天,、第1天、第3天,、第7天,。可以對水樣品,、制程樣品,、原料樣品、甚至成品藥樣品進行保存時間研究,，確定檢測前的有效保存時間,。在進行保存時間研究時，對每一種樣品加入已知濃度的內(nèi)毒素,。建議用戶在標準曲線中點處加入盡量低的濃度的內(nèi)毒素,。但加入的濃度越高，越能在2倍該濃度內(nèi)回收樣品,。例如美國注射劑協(xié)會（PDA）“TR 82技術報告"中規(guī)定加入的濃度為5 EU/mL（EU/mL：每毫升內(nèi)毒素活性單位）2。在建議的所有時間點檢測樣品,，測量并確認樣品未損失內(nèi)毒素,。
如果不進行研究就保存樣品，檢測就可能出現(xiàn)假陰性結果,，從而導致患者安全風險,。實驗室一旦確認樣品在7天內(nèi)未損失內(nèi)毒素,，就可以在“標準操作規(guī)程"中規(guī)定樣品的保存時間或要求的檢測時間可以延長到7天，以便每周一次性集中檢測所有保存的樣品,，而非每天都耗費精力來檢測樣品,。
Sievers Eclipse是合規(guī)的內(nèi)毒素檢測平臺，滿足USP<85>,、EP 2.6.14,、JP 4.01、ChP<1143>等藥典的要求,。此平臺提供包含5個參考標準品內(nèi)毒素（RSE,，Reference Standard Endotoxin）濃度的嵌入式標準曲線，濃度范圍為50-0.005 EU/mL,，一式三份，為每個樣品提供嵌入式陽性產(chǎn)品對照液（PPC, Positive Product Control）,。此平臺是高通量內(nèi)毒素檢測平臺,，用戶可以在單次檢測中大大增加樣品數(shù)量，從而提高檢測效率,、降低總體成本,。已經(jīng)或打算延長樣品保存時間的用戶在用Eclipse進行檢測時，可以采用鱟試劑“凍融法（Freeze-Thaw）",。事實證明,，在初次重構后冷凍鱟試劑，稍后在Eclipse上用解凍的該試劑來檢測樣品,，檢測結果同非凍融法一致3,。
GMP建議用戶為樣品檢測確定正確的樣品保存時間。用戶可以進行簡單研究,，較大化提高質量控制實驗室的樣品檢測通量,，大大減少總體操作時間，從而提高實驗室的效率,、降低成本,。
參考文獻
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