重組酶聚合酶擴增技術(Recombinase Polymerase Amplification,，RPA)能夠在 恒溫條件下(37℃-42℃)實現(xiàn)對核酸的快速特異性擴增,，且在20min內(nèi)可將核酸擴增至可檢 測水平，具有良好的可操作性,，能夠在非實驗室條件下完成核酸檢測,，被稱為是具有可替代PCR潛力的核酸檢測技術，且可以和瓊脂糖凝膠檢測,、熒光檢測技術結(jié)合實現(xiàn)實時,、快速甚至定量檢測。常溫等溫,，是指維持在某一特定的溫度,，溫度為22-42℃，接近常溫,，溫度保持恒定,，因為這種反應對設備的要求比較低，更適合應用于POCT或者即時診斷,。
常規(guī)的RPA檢測試劑需低溫保存,、運輸，并且反復凍融會影響性能的穩(wěn)定,。因此,，開發(fā)常溫下穩(wěn)定保存、便于運輸?shù)脑嘡PA劑至關重要,。將RPA檢測試劑制備成為凍干試劑是解決上述問題的可行思路,。然而，RPA與CRISPR檢測試劑是一種成分復雜的組合物,，特別是凍干的RPA試劑與凍干的CRISPR試劑再反應過程中會混合為一個體系,，其成分進一步復雜化，包含DNA,、RNA和酶,、凍干成分等物質(zhì)。因而,，在開發(fā)具體的檢測試劑過程中,，如何改進凍干試劑的組成，特別是如何設置凍干保護劑的組成,，進而保證檢測試劑的穩(wěn)定性,，避免其性能降低，這是一個重要的問題,。
RPA試劑包含緩沖液,，重組酶、DNA 聚合酶,、逆轉(zhuǎn)錄酶,、dNTP 、ATP和PEG 35000等,。在常溫下實現(xiàn)反應,。
1. 緩沖液：緩沖液是RPA試劑中常見的成分之一，它有助于維持反應體系的pH值穩(wěn)定,，從而確保反應的準確性和可靠性,。
2. 酶：酶是RPA試劑中的關鍵成分，包含重組酶,，DNA聚合酶,、逆轉(zhuǎn)錄酶等，它們負責催化特定的化學反應,。
3. 引物：引物是用于PCR（聚合酶鏈式反應）等反應的特異性DNA片段,，它們幫助擴增目標DNA序列,。包括一對或者多對引物。
4. 熒光染料：用于實時PCR等需要熒光檢測的技術中,，幫助實時監(jiān)測反應進程,。
由于RPA試劑包含多重成分，成分復雜,，如各種酶,，相互耐受溫度，環(huán)境都不一樣,，保存條件很苛刻,，而凍干成為解決保存的方法之一。凍干法是采用低溫升華的方法,，這種情況下不改變物質(zhì)的特性,，降低到很低的含水量，鎖住物質(zhì)本身的活性,，復溶后恢復活性,，獲得液體狀態(tài)下或者物質(zhì)本身的新鮮狀態(tài)。而RPA試劑凍干不同于常規(guī)的PCR試劑,，由于其成分復雜,，因此凍干保護劑和凍干曲線需要摸索。我公司在開發(fā)過程中建立了各種試劑的凍干保護體系和凍干曲線,，購買任意一款硅油循環(huán)凍干機,，我公司都可以提供免費的凍干技術協(xié)助。歡迎資料RPA凍干試劑凍干設備,，凍干微球成型儀,，微球分裝機。
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