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微生物的保存方法很多,，根據(jù)不同的微生物菌（毒）株或不同的實驗要求,，可選用不同的保存方法，其中常見的有斜面保存法,，穿刺保存法,、液體石蠟保藏法、沙土管保存法,、冷凍保存法,、真空冷凍干燥保存法。其中真空冷凍干燥保存法方便復活,、保存期長，運輸和保存方便,，活菌率高,。

冷凍干燥是將菌體懸浮液冷凍到冰點以下，從而轉(zhuǎn)變?yōu)楣腆w結晶態(tài),，然后在低溫低壓(真空)下使固體升華而脫水的干燥方法,。一般干燥處理過程會破壞微生物的細胞膜，引起細胞的大量死亡,，因此需要添加保護劑,，能夠使菌液密度均一，減少活菌在凍干過程中的機械效應和溶質(zhì)效應帶來的死亡,。因此,，在凍干前加入的保護劑配方就成為了至關重要的決定性因素,，它既會影響到儲存期細胞的活性以及穩(wěn)定性，也會影響到復水時細胞存活率,。

     凍干法是長期保存細菌,、酵母、真菌,、病毒和立克次氏體的標準方法（在凍干前一般要加冷凍保護劑,，這樣可使細胞免除在冷凍初期因形成冰晶而造成的損害。ATCC 常規(guī)用10％脫脂奶或12％蔗糖作為冷凍保護劑,，而美國農(nóng)業(yè)部（USDA）的農(nóng)業(yè)研究服務機構的實驗人員用?；蝰R血清作為微生物的冷凍保護劑（。在菌液中加入甘油和二甲亞砜（DMSO）也可防止冷凍中微生物的死亡,，但實際操作中應根據(jù)不同微生物決定應用或不用保護劑,。
    真空冷凍干燥法保存菌種的步驟主要包括：

1、微生物培養(yǎng),，培養(yǎng)獲得健壯的菌種擴培液體,。培養(yǎng)時根據(jù)菌種選擇不同的培養(yǎng)基。培養(yǎng)到對數(shù)期獲得大量健壯的菌種,，保證菌體濃度,，一般達到10⁹的濃度.

2、離心收集菌體,。通過離心法從液體培養(yǎng)基中獲得菌體,。如果是固體培養(yǎng)基可以直接收集菌落，用保護劑溶解混勻,。

3,、將菌體、脫脂奶粉,、海藻糖,、蔗糖等保護劑在無菌水中混勻得到含有保護劑的菌體混懸液。

4,、分裝,。將菌體混懸液在無菌環(huán)境中分裝到無菌容器中，可以是安瓿瓶,、西林瓶,、EP、培養(yǎng)皿等,。

5,、預凍，預凍是非常關鍵的,。預凍不好,，菌體會死亡,。要快速預凍，防止產(chǎn)生大冰晶造成細胞死亡,。預凍要凍結實,，保證預凍充分。

6,、將預凍好的菌體,，放入真空冷凍干燥設備中進行凍干。如果是設備帶預凍功能,，也可以直接在凍干機上進行預凍,。真空冷凍干燥時間和凍干曲線的 設計要根據(jù)菌種的不同和菌體混懸液的濃度等進行設計。凍干好后真空密封保存,。

   微生物凍干法采用的凍干設備可以有多種選擇,，從實驗室凍干機到研發(fā)型凍干機都可以適用。如以下系列凍干機都可以用來凍干保存微生物,。