一,、掃描電鏡SEM檢測(cè)服務(wù)的制樣步驟:
(1)取材固定:新鮮組織確定取材部位,盡量減小牽拉,、挫傷與擠壓等機(jī)械損傷,,1-3min內(nèi)取樣,組織塊面積不超過(guò)3mm2,,用PBS輕輕漂洗將樣本表面的血污,,毛發(fā)等去掉,保護(hù)好需要掃描的面并做好標(biāo)記(如在對(duì)面進(jìn)行剪角處理),。迅速投入電鏡固定液室溫固定2h,,再轉(zhuǎn)移至4°保存。
(2)貼壁細(xì)胞:貼壁于蓋玻片的細(xì)胞培養(yǎng)處理完成后棄培養(yǎng)基,,用PBS輕輕漂洗后,,棄PBS加電鏡固定液室溫固定2h,再轉(zhuǎn)移至4°保存,。注意保護(hù)好掃描面避免劇烈震蕩細(xì)胞脫落,。
(3)后固定:固定好的樣品經(jīng)0.1M磷酸緩沖液PB(PH7.4)漂洗3次,每次15min,。0.1M磷酸緩沖液PB(PH7.4)配制1%鋨酸室溫避光固定1-2h,。0.1M磷酸緩沖液PB(PH7.4)漂洗3次,每次15min,。
(4)脫水:組織依次入30%-50%-70%-80%-90%-95%-100%-100%酒精每次15min,乙酸異戊酯 15min,。
(5)干燥:將樣本放入臨界點(diǎn)干燥儀內(nèi)進(jìn)行干燥。(干燥的樣品及無(wú)機(jī)材料不需要以上步驟)
(6)樣本導(dǎo)電處理:將樣本緊貼于導(dǎo)電碳膜雙面膠上放入離子濺射儀樣品臺(tái)上進(jìn)行噴金30s左右,。
(7)掃描電子顯微鏡下觀察采圖,。
二、掃描電鏡SEM檢測(cè)服務(wù)樣本準(zhǔn)備方法及要求:
1,、動(dòng)植物組織樣本:
① 1-3min內(nèi)取樣,,組織塊不超過(guò)3mm2,用PBS輕輕漂洗將樣本表面的血污,,毛發(fā)等去掉,,將需要掃描的面做好標(biāo)記(如在對(duì)面進(jìn)行剪角處理)。
② 取材時(shí)一定注意避免鑷子擠壓等機(jī)械損傷,,刀片要鋒利避免挫傷組織,。尤其是注意保護(hù)掃描面。
③ 組織取下后立即投入電鏡固定液內(nèi)室溫固定2h,,再轉(zhuǎn)移至4℃保存,,4℃冰袋運(yùn)輸,在保存和運(yùn)輸過(guò)程中固定液切勿冷凍結(jié)冰,。
④ 植物樣本放入固定液后需抽氣沉底,。
2,、細(xì)胞樣本:
貼壁細(xì)胞:貼壁于蓋玻片的細(xì)胞培養(yǎng)處理完成后棄培養(yǎng)基,用PBS輕輕漂洗后,,棄PBS加電鏡固定液室溫固定2h,,再轉(zhuǎn)移至4℃保存,4℃冰袋運(yùn)輸,,在保存和運(yùn)輸過(guò)程中固定液切勿冷凍結(jié)冰,。
懸浮細(xì)胞:離心收集細(xì)胞要肉眼可見細(xì)胞沉淀芝麻至綠豆大小,棄培養(yǎng)基后用PBS輕輕漂洗后,,棄PBS加電鏡固定液并將細(xì)胞吹打開懸浮于固定液內(nèi)室溫固定2h,,再轉(zhuǎn)移至4℃保存,4℃冰袋運(yùn)輸,,在保存和運(yùn)輸過(guò)程中固定液切勿冷凍結(jié)冰。
3,、細(xì)菌樣本:
長(zhǎng)于固體培養(yǎng)基的細(xì)菌:連帶著培養(yǎng)基切下不超過(guò)3mm2組織塊,,有細(xì)菌的一面作為掃描面,,放于電鏡固定液內(nèi)室溫固定2h,再轉(zhuǎn)移至4℃保存,, 4℃冰袋運(yùn)輸,在保存和運(yùn)輸過(guò)程中固定液切勿冷凍結(jié)冰,。
懸浮細(xì)菌孢子等:離心收集細(xì)菌要肉眼可見細(xì)菌沉淀芝麻至綠豆大小,棄培養(yǎng)基后用PBS輕輕漂洗后,,棄PBS加電鏡固定液并將細(xì)菌吹打開懸浮于固定液內(nèi)室溫固定2h,再轉(zhuǎn)移至4℃保存,,4℃冰袋運(yùn)輸,,在保存和運(yùn)輸過(guò)程中固定液切勿冷凍結(jié)冰。
4,、其他如粉末狀材料:
直接準(zhǔn)備干燥的粉劑。帶有磁性的金屬材料(鐵,,鈷,鎳等)不能做掃描電鏡,。