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產(chǎn)品簡介
免疫熒光（雙標(biāo)）,，在同一組織細(xì)胞標(biāo)本上需要同時(shí)檢測兩種抗原時(shí),，需進(jìn)行雙重?zé)晒馊旧ｋp重免疫熒光標(biāo)記法（double immunofluorescence labeling method）也分為直接法和間接法,。
詳細(xì)介紹
免疫熒光（雙標(biāo)）
免疫熒光（雙標(biāo)）
服務(wù)簡介：
在同一組織細(xì)胞標(biāo)本上需要同時(shí)檢測兩種抗原時(shí),，需進(jìn)行雙重?zé)晒馊旧ｋp重免疫熒光標(biāo)記法(double immunofluorescence labeling method)也分為直接法和間接法,。
冰凍切片熒光tunel+免疫熒光雙標(biāo)實(shí)驗(yàn)步驟
1,、 冰凍切片固定：冰凍切片從冰箱拿出來復(fù)溫，晾干水分,，冷丙酮固定10min,，待丙酮*干后于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次，每次5min,。
2,、 修復(fù)：切片稍甩干后用組化筆在組織周圍畫圈（防止液體流走），在圈內(nèi)滴加蛋白酶K工作液（蛋白酶K儲(chǔ)存液用PBS 1:9稀釋）覆蓋組織,，37度溫箱孵育30min,。將玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次，每次5min,。
3,、 破膜：切片稍甩干后在圈內(nèi)滴加破膜工作液覆蓋組織，常溫下孵育20min,，將玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次,，每次5min。
4,、 加試劑1,2：按片子數(shù)量和組織大小取tunel試劑盒內(nèi)適量試劑1 (TdT) 和試劑2(dUTP)按2:29混合（試劑1,2為現(xiàn)配現(xiàn)用）,，加到圈內(nèi)覆蓋組織，切片平放于濕盒內(nèi),，37℃恒溫孵育2小時(shí),，濕盒內(nèi)加少量水保持濕度。
5,、 BSA封閉:將玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次,，每次5min，在圈內(nèi)滴加用3%BSA均勻覆蓋組織,，室溫封閉30min。
6,、 加一抗：輕輕甩掉封閉液,，在切片上滴加PBS按一定比例配好的一抗,，切片平放于濕盒內(nèi)4°C孵育過夜。（濕盒內(nèi)加少量水防止抗體蒸發(fā)）
7,、 加二抗：玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次,，每次5min。切片稍甩干后在圈內(nèi)滴加與一抗相應(yīng)種屬的二抗覆蓋組織,，避光室溫孵育50min,。
8、 DAPI復(fù)染細(xì)胞核：切片用PBS（PH7.4）洗滌3次,，每次5min,。去除PBS后在圈內(nèi)滴加DAPI染液，避光室溫孵育10min,。
9,、封片：玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次，每次5min,。切片稍甩干后用抗熒光淬滅封片劑封片,。
10、 鏡檢拍照：切片于尼康倒置熒光顯微鏡下觀察并采集圖像,。（紫外激發(fā)波長330-380nm,，發(fā)射波長420nm；FITC綠光激發(fā)波長465-495nm,，發(fā)射波長515-555 nm,；CY3紅光激發(fā)波長510-560，發(fā)射波長590nm）
石蠟切片熒光tunel+免疫熒光雙標(biāo)實(shí)驗(yàn)步驟
1,、 石蠟切片脫蠟至水
2,、 修復(fù)：切片稍甩干后用組化筆在組織周圍畫圈（防止液體流走），在圈內(nèi)滴加蛋白酶K工作液（蛋白酶K儲(chǔ)存液用PBS 1:9稀釋）覆蓋組織,，37度溫箱孵育30min,。將玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次，每次5min,。
3,、 破膜：切片稍甩干后在圈內(nèi)滴加破膜工作液覆蓋組織，常溫下孵育20min,，將玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次,，每次5min。
4,、 加試劑1,2：按片子數(shù)量和組織大小取tunel試劑盒內(nèi)適量試劑1 (TdT) 和試劑2(dUTP)按2:29混合,，加到圈內(nèi)覆蓋組織，切片平放于濕盒內(nèi),，37℃恒溫箱孵育2小時(shí),，濕盒內(nèi)加少量水保持濕度,。
5、 BSA封閉:將玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次,，每次5min,，在圈內(nèi)滴加用3%BSA均勻覆蓋組織，室溫封閉30min,。
6,、 加一抗：輕輕甩掉封閉液，在切片上滴加PBS按一定比例配好的一抗,，切片平放于濕盒內(nèi)4°C孵育過夜,。（濕盒內(nèi)加少量水防止抗體蒸發(fā)）
7、 加二抗：玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次,，每次5min,。切片稍甩干后在圈內(nèi)滴加與一抗相應(yīng)種屬的二抗覆蓋組織，避光室溫孵育50min,。
8,、 DAPI復(fù)染細(xì)胞核：切片用PBS（PH7.4）洗滌3次，每次5min,。去除PBS后在圈內(nèi)滴加DAPI染液,，避光室溫孵育10min。
9,、封片：玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次,，每次5min。切片稍甩干后用抗熒光淬滅封片劑封片,。
10,、 鏡檢拍照：切片于尼康倒置熒光顯微鏡下觀察并采集圖像。（紫外激發(fā)波長330-380nm,，發(fā)射波長420nm,；FITC綠光激發(fā)波長465-495nm，發(fā)射波長515-555 nm,；CY3紅光激發(fā)波長510-560,，發(fā)射波長590nm）
上海茁彩生物科技有限公司,可以承接諸多病理實(shí)驗(yàn)，樣本不僅含有基礎(chǔ)的動(dòng)物組織切片,，還包括植物葉片,、動(dòng)物細(xì)胞、骨片,、腦片,、皮膚等特殊樣本。染色種類多，染色方法全.石蠟染色,，冰切染色均可操作,同時(shí)還可以承接整體實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目,細(xì)胞實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目,包括樣本的造模,細(xì)胞的培養(yǎng),以及后續(xù)細(xì)胞的增殖,、細(xì)胞粘附,、細(xì)胞劃痕等實(shí)驗(yàn).