改良苯.酚品紅染色

二、實驗步驟

　　1,、取材：查閱相關(guān)植物對應(yīng)的根尖分裂旺盛期,，在此期間剪取新生根尖約2-3cm，純水稍洗凈,。

　　2,、預(yù)處理：用秋水仙素或者8-羥基喹啉預(yù)處理或者置于純水中4℃處理約24h(選做)。

　　3,、固定：取出根尖置于卡諾氏固定液(無水乙醇：冰醋酸=3:1混勻)中4℃固定約1-4h,，轉(zhuǎn)移根尖至75%的乙醇中保存;

　　4、低滲：取出根尖純水稍洗2遍,，置于純水中浸泡約30min;

　　5,、解離：取出根尖置于1M HCL溶液中60℃處理10-30min，純水洗2遍,，置于純水中浸泡約30min;

　　6,、取材染色：將根尖用純水清洗2遍后置于載玻片上,，切取根尖分生區(qū)并撥散，組畫筆畫圈,，晾干或者稍烤干分生區(qū)組織細胞,，滴加改良苯.酚品紅染液染色15-35min;

　　7、壓片：直接用染色液封片,，稍吸除多余的染色液,，蓋玻片上覆蓋濾紙，用橡皮擦或者手指平整地按壓玻片進行壓片,，分散染色體;

　　8,、封片：將制好的玻片放置-20℃下冰凍約10min，取出后用刀片從蓋玻片一角迅速撬開,，晾干或烤干載玻片和蓋玻片,，甘油明膠或中性樹膠封片。

　　9,、顯微鏡鏡檢,，圖像采集分析。

　　三,、結(jié)果判讀：

　　染色體呈深的紫紅色,，背景淺的紫紅色或者無色。

　　四,、注意事項：

　　1,、若固定后的根尖暫時不使用，保存在75%的乙醇中,，下次使用前需要再次固定,，4℃條件下約4h。

　　2,、壓片過程中,，防止蓋玻片移動或者破裂，得到數(shù)量清晰的染色體,，此步驟操作較難成功,。

　　3、改良苯.酚品紅染色液陰涼通風(fēng)處可保存1年不變質(zhì),。