詳細(xì)介紹
樹脂包埋(透射電鏡)
樹脂包埋(透射電鏡)
樹脂包埋實(shí)驗(yàn)步驟:
1,、取材:電鏡取材非常嚴(yán)格,取材過程中速度要快,,5分鐘內(nèi)要將組織取出放入固定液中,;取材組織塊要小,一般要求將組織切成1立方毫米大??;取材部位要準(zhǔn)確、取材溫度要低是在4℃條件下進(jìn)行,;取材工具要干凈,,鋒利,。如果是貼壁細(xì)胞不可用酶消化下來,先吸去培養(yǎng)液然后加入電鏡固定液用橡膠塊刮下細(xì)胞,,離心,,細(xì)胞體積保證綠豆大小即可,然后吸去上清更換固定液繼續(xù)固定,。
2,、固定:取材后要及時(shí)固定,組織,、細(xì)胞,、蛋白等固定選用2.5%中性戊二醛固定液,植物等標(biāo)本則需要選用多聚甲醛和戊二醛的混合固定液,。室溫固定兩小時(shí)左右后,,放入4℃保存運(yùn)輸(如果是植物或者肺組織,則需要進(jìn)行真空抽氣固定,,一般需要抽氣固定24小時(shí)左右,,直至標(biāo)本*沉入容器底部)。
3,、鋨酸后固定:將標(biāo)本從固定液中取出,,用0.1mol/L的PB清洗并過夜,第二天轉(zhuǎn)入1%鋨酸后固定,,固定時(shí)間普通標(biāo)本2h左右,,植物標(biāo)本8至12h左右。
4,、脫水:鋨酸固定后的標(biāo)本用用0.1mol/L的PB清洗后使用梯度乙醇脫水,,濃度依次是50%、70%,、80%,、90%、95%,、100%,,植物標(biāo)本則會在50%乙醇前面再增加一個(gè)30%乙醇梯度,脫水時(shí)間普通標(biāo)本為10~15min,,植物標(biāo)本脫水時(shí)間為1~1.5h4,、浸透:用丙酮作為乙醇和樹脂間的過度溶劑,從純丙酮開始,,中間經(jīng)過丙酮和樹脂的混合劑,,混合比例丙酮從高到低到純樹脂,整個(gè)浸透過程需要1~2天完成,。
5,、包埋:先將組織對應(yīng)的標(biāo)簽放包埋板中,,然后加入樹脂,再將浸透好的樣本放入包埋板中,,調(diào)整好包埋面,,然后放入恒溫箱內(nèi)熟化,熟化過程需要2~3天,。熟化完成后,,樣本樹脂包埋完成。
上海茁彩生物科技有限公司,可以承接諸多病理實(shí)驗(yàn),,樣本不僅含有基礎(chǔ)的動物組織切片,,還包括植物葉片、動物細(xì)胞,、骨片,、腦片、皮膚等特殊樣本,。染色種類多,,染色方法全.石蠟染色,冰切染色均可操作,同時(shí)還可以承接整體實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目,細(xì)胞實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目,包括樣本的造模,細(xì)胞的培養(yǎng),以及后續(xù)細(xì)胞的增殖,、細(xì)胞粘附,、細(xì)胞劃痕等實(shí)驗(yàn).
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