詳細介紹
免疫組化服務實驗收費標準:
項目編號 | 項目名稱 | 計價單位 | 單價 |
ZC1068 | 免疫組化 | 張 | 35元 |
實驗結果展示:
免疫組化服務實驗流程:
石蠟切片免疫組化實驗步驟:
1,、 石蠟切片脫蠟至水:依次將切片放入二甲苯Ⅰ15min-二甲苯Ⅱ15min-無水乙醇Ⅰ5min-無水乙醇Ⅱ5min-85%酒精5min-75%酒精5min-蒸餾水洗。
2,、 抗原修復:組織切片置于盛滿EDTA抗原修復緩沖液(PH9.0)的修復盒中于微波爐內進行抗原修復,,中火8min至沸,?;?min保溫再轉中低火7min,,此過程中應防止緩沖液過度蒸發(fā),切勿干片,。自然冷卻后將玻片置于PBS(PH7.4)中在脫色搖床上晃動洗滌3次,,每次5min,。
3、 阻斷內源性過氧化物酶:切片放入3%過氧化|氫溶液(雙氧水:純水=1:9),,室溫避光孵育25 min,,將玻片置于PBS(PH7.4)中在脫色搖床上晃動洗滌3次,每次5min,。
4,、 BSA或者血清封閉:切片稍甩干后用組化筆在組織周圍畫圈(防止抗體流走),在圈內滴加用3%BSA或者10%正常兔血清均勻覆蓋組織,,室溫封閉30min,。(一抗是山羊來源用10%正常兔血清封閉,一抗其它來源的用3%BSA封閉)
5,、 加一抗:輕輕甩掉封閉液,,在切片上滴加PBS按一定比例配好的一抗,切片平放于濕盒內4°C孵育過夜,。(濕盒內加少量水防止抗體蒸發(fā))
6,、 加二抗:玻片置于PBS(PH7.4)中在脫色搖床上晃動洗滌3次,每次5min,。切片稍甩干后在圈內滴加與一抗相應種屬的二抗(HRP標記)覆蓋組織,,室溫孵育50min。
7,、 DAB顯色:玻片置于PBS(PH7.4)中在脫色搖床上晃動洗滌3次,,每次5min。切片稍甩干后在圈內滴加新鮮配制的DAB顯色液,,顯微鏡下控制顯色時間,,陽性為棕黃色,自來水沖洗切片終止顯色,。
8,、 復染細胞核:Harris蘇木素復染3min左右,自來水洗,,1%的鹽酸酒精分化數秒,,自來水沖洗,氨水返藍,,流水沖洗。
9,、 脫水封片:將切片依次放入75%酒精6min-85%酒精6min --無水乙醇Ⅰ6min -無水乙醇Ⅱ6min -二甲苯Ⅰ5min 中脫水透明,,將切片從二甲苯拿出來稍晾干,中性樹膠封片,。
10,、 顯微鏡鏡檢,,圖像采集分析。